目次
I. 緖論 6
II. 實驗 8
1. 재료 8
1) 동물 8
2) 약재 8
3) 시약 및 기기 9
2. 方法 10
In vitro 10
1) 추출물 분리 10
2) mLFCs 배양 및 細胞毒性 측정 11
3) Human Fibroblast-Like Synoviocytes(hFLSs) 배양 12
4) hFLSs의 역전사-중합효소 연쇄반응(RT-PCR) 12
(1) RNA 추출 12
(2) 역전사-중합효소 연쇄반응 (RT-PCR) 13
(3) cDNA PCR 13
5) Real-time quantitative PCR 분석 14
(1) RNA extract and cDNA 합성 14
(2) SYBR Green I with the Smart Cyclerⓡ System 15
6) ELISA에 의한 싸이토카인 측정 15
7) Electromobility shift assay (EMSA) 16
(1) 세포 배양 및 약물 처리 16
(2) Nuclear extract 16
(3) Gel mobility shift assay 16
8) hFLSs 細胞 增殖 억제효과 측정 17
9) 細胞內 reactive oxygen species (ROS)의 분석 17
In vivo 19
1) CII 접종과 약물 투여 19
2) Arthritis index(AI) and incidence 분석 19
3) 류마토이드 인자(RF)인 IgG3, IgG2b와 IgM의 혈청분석 19
4) CD4+, CD8+, CD25+, CD69+, N.K 1.1+ 형광 세포 분석 19
5) 조직학적 검사 20
Ⅲ. 實驗成績 21
□ In vitro 21
1. mLFCs와 hFLSs 세포에 대한 세포독성 21
2. 활액막 세포의 염증 유발 싸이토카인에 미치는 영향 23
1) IL-1β유전자 발현에 미치는 영향 23
2) IL-6 유전자 발현에 미치는 영향 25
3) TNF-α 유전자 발현에 미치는 영향 27
(1) RT-PCR 분석 27
(2) Real-time quantitative RT-PCR 분석 29
4) COX-2 유전자 발현에 미치는 영향 30
(1) RT-PCR 분석 30
(2) Real-time quantitative RT-PCR 분석 32
5) NOS-II 유전자 발현에 미치는 영향 33
6) GM-CSF 유전자 발현에 미치는 영향 35
3. ELISA kit에 의한 염증 유발 싸이토카인 정량 37
1) IL-1β 분비량에 미치는 효과 37
2) IL-6 분비량에 미치는 효과 39
4. hFLSs에서 NF-κB binding activity에 미치는 영향 41
5. hFLSs에서 AP-1 binding activity에 미치는 영향 42
6. hFLSs 증식에 미치는 영향 43
7. 세포내 reactive oxygen species (ROS)에 미치는 영향 45
□ In vivo 46
1. 관절염 발생율에 미치는 영향 46
2. 류마토이드 인자(RF)에 미치는 영향 48
1) IgG3에 미치는 영향 48
2) IgM에 미치는 영향 50
3) IgG2b에 미치는 영향 52
3. 면역 형광 세포에 미치는 영향 54
1) CD4+/CD8+ 세포수 변화 54
2) CD8+/B220+ 세포수 변화 54
3) CD4+/B220+ 세포수 변화 54
4) NK+/CD3e+ 세포수 변화 54
5) CD28+/CD3e+ 세포수 변화 60
6) CD69+/CD3e+ 세포수 변화 60
7) CD69+/CD44+ 세포수 변화 60
4. Collagen 유발 백서의 혈청 싸이토카인에 미치는 영향 65
1) IL-10 생산량에 미치는 영향 65
2) TNF-α 생산량에 미치는 영향 67
5. 조직화적 변화 69
Ⅳ. 考察 71
Ⅴ. 結論 82
參考文獻 85
Abstract 97