[표제지 등]
제출문
연구 목적의 요약
Summary
요약문
목차
제1장 서론 14
제2장 재료 및 방법 16
제1절 실험재료 16
1. 사용균주 16
2. 사용배지 16
제2절 실험 방법 18
1. 고온성 알콜 발효효모의 분리 18
2. 내당성 측정 18
3. 알콜 내성의 측정 18
4. 중금속에 대한 내성측정 19
5. 전분질 기질의 액화 및 당화 19
6. 발효균의 전배양 19
7. 에탄올 발효 19
가. 플라스크 스케일 19
나. Jar-fermentor scale 20
8. 분석 방법 20
제3장 결과 및 고찰 22
제1절 고온성 알콜 발효효모의 분리 및 동정 22
1. 시료의 전처리 22
2. Durham tube에서의 1차 선별 22
3. Flask scale 에서의 2차 선별 22
4. Jar-fermentor scale 에서의 최종 선별 24
5. 분리효모의 동정 24
제2절 고온성 발효효모의 균학적 특성 32
1. 고온 중식능 32
2. 분리균주의 내당성 32
3. 분리 균주의 내알콜성 33
4. 고온 알콜발효에서의 발효 부산물 확인 33
5. 분리 균주의 중금속 내성 38
제3절 고온성 발효호모의 고온 발효조건 검토 41
1. Flask scale 41
가. 발효 온도의 영향 41
나. 초기 pH 에 따른 영향 41
다. 교반 효과 41
라. 기질 농도에 따른 영향 46
마. 질소원에 따른 영향 46
바. Yeast extract 첨가농도의 영향 52
사. 마그네슘 이온 첨가에 따른 영향 52
아. 소포제 첨가에 따른 영향 55
자. Seed volume의 영향 55
차. 기타 기질에 대한 고온 발효 55
2. Jar-fermentor scale 59
가. Aeration의 영향 59
나. 발효 pH 조절의 영향 61
제4절 고온성 발효 효모의 이용성 검토 64
1. Potato starch를 기질로 한 고온 발효 64
2. Temperature-gradient fermentation 70
3. Vacuum fermentation 가능성 검토 70
제4장 결론 75
참고문헌 78
[내당성 및 응집성 효모 균주의 개발] 84
제출문 84
요약문 85
SUMMARY 88
목차 92
제1장 서론 97
제1절 주요 연구목표(당해년도) 97
제2절 연구의 필요성 97
제3절 관련 연구사례 100
제4절 연구 추진방안 105
제2장 실험재료 및 방법 107
제1절 알콜발효 효모균주의 수집과 선별 107
1. 균주 107
2. 1차 선별 107
3. 2차 선별 111
4. 3차 선별 114
5. 4차 선별 115
제2절 효모균주의 동정 115
1. 포자 형성과 형태관찰 115
2. Budding 방식 관찰 115
3. Nitrate assimilation test 116
제3절 당내성 효모균주의 수집과 분리 116
1. 균주 116
2. 배지와 배양 116
3. 당내성 측정 118
4. 발효능 측정 118
제4절 원형질체 융합에 의한 고온. 당내성 균주개발 119
1. 우수 균주의 선별 119
가. 균주 119
나. 배지 및 배양 119
다. 에탄올 내성 측정 120
라. 당내성 측정 120
마. 에탄올 정량 120
바. 응집성 측정 121
사. 고온 내성 측정 121
2. 돌연변이를 통한 selection marker 의 도입 122
가. 균주 122
나. 배지 및 배양 122
다. UV에 의한 돌연변이의 유발 122
(1) UV box의 제작 122
(2) 생존 곡선의 작성 123
라. EMS에 의한 돌연변이의 유발 123
마. 영양 요구성 돌연변이주의 분리 123
바. Auxotrophic mutation marker의 분석 124
사. Respiratory deficient mutant의 획득 124
3. 원형질체 융합 125
가. 삼투 안정제 및 세포벽 분해 효소의 제작 125
나. 원형질체 형성 125
다. PEG 용액의 조성 126
라. 원형질체 융합 126
마. 융합주의 선별 127
4. 융합주의 유전적 안정성 확인 127
가. 발효력에 대한 안정성 127
나. 고온 내성에 대한 안정성 127
제5절 연속 배양에의한 알콜내성 균주의 분리방법 확립 128
1. 사용 균주 128
2. 배지 128
3. 배양 조건 128
4. pH로 조절되는 연속배양 129
5. 분석 방법 129
제3장 결과 및 고찰 131
제1절 각 발효특성별 우수 균주의 선별 131
1. 1차 선별 131
2. 2차 선별 137
3. 3차 선별 140
[4. 4차 선별] 140
제2절 효모균주의 동정 143
제3절 당내성 균주의 수집과 분리 143
1. 당내성 우수균주의 선별 143
2. 선별된 우수 균주의 당내성 149
제4절 원형질체 융합에의한 고온·당내성 균주의 개발 153
1. 사용 균주의 발효적 특성 153
2. Selection marker의 도입 153
가. Auxotrophic mutation marker의 도입 153
나. Petite mutation marker의 도입 158
3. 원형질체 융합 159
가. 균주 159
나. 원형질체의 형성 159
(1) 원형질체 형성에 대한 삼투 안정제의 영향 159
(2) 원형질체의 형성에 대한 세포벽 분해 효소의 농도와 처리 시간의 영향 162
(3) 원형질체의 형성에 대한 전처리 물질의 영향 165
(4) 원형질체의 형성에 대한 pH의 영향 168
4. 원형질체의 융합 168
5. 융합주의 발효적 특성 비교 및 우수 균주의 선별 171
가. 고온내성의 비교 171
나. 응집성의 비교 171
다. 당내성의 비교 174
라. 발효력 비교 181
마. 융합주의 안정성 188
제5절 교배(Rare-mating)기술의 확립 194
제6절 연속배양에 의한 알콜내성 및 발효능 우수균주의 분리방법 확립 197
1. 회분식 배양 199
2. pH로 조절되는 연속배양과 에탄올 내성균주 선별 201
제4장 결론 205
참고문헌 208