[표지]
요약문
목차
Abstract 10
I. 서론 11
II. 연구내용 및 방법 14
1. LMO 17개 이벤트 표준물질에서 유전자 확보 14
가. LMO 검출을 위한 표준시료 확보 14
나. LMO 17 이벤트 표준물질로부터 genomic DNA 순수분리 19
2. LMO 17개 이벤트 유전정보 확보 21
가. 동시검출기법 개발 대상 LMO의 유전 정보수집 21
3. PCR 생성물 크기에 따른 프라이머 제작 및 작동 유무 확인 23
가. PCR 생성물 크기에 따른 프라이머 제작 23
나. 제작된 프라이머의 작동 유무 검증 23
4. 최적 동시검출(multiplex-PCR) 조건 확립 24
가. LMO 검출을 위한 multiplex-PCR 조건 수립 24
나. 개발된 multiplex-PCR법의 효율성 입증 25
III. 연구결과 및 고찰 26
1. LMO 17개 이벤트 표준물질에서 유전자확보 26
가. LMO 검출을 위한 표준시료 확보 27
나. LMO 17개 이벤트 genomic DNA 순수 분리 및 검증 28
2. LMO 17개 이벤트 유전정보 확보 30
가. 도입 유전자의 특성 및 주변염기서열 정보 확보 30
3. PCR 생성물 크기에 따른 프라이머 제작 및 작동 유무 확인 35
가. PCR 생성물 크기에 따른 프라이머 제작 35
나. 제작된 프라이머의 작동 유무 검증 37
4. 최적 동시검출(multiplex-PCR) 조건 확립 40
가. 반응액 중 각 프라이머의 최적 농도 및 반응온도 결정 40
나. 개발된 multiplex-PCR법의 효율성 입증 46
IV. 결론 및 제언 48
참고문헌 50
표 1. 2014년 JRC-IRMM(SIGMA Korea) 구입 표준물질 목록 14
표 2. 2014년 AOCS(Biofact) 구입 표준물질 목록 16
표 3. 국립환경과학원 이관 LMO 표준물질 및 프라이머 셋트 목록 18
표 4. 유채, 콩, 면화의 내재유전자 검출 프라이머 및 이를 증폭할 수 있는 검출... 20
표 5. PCR 증폭을 위한 혼합 반응액의 반응 조건 21
표 6. 2014년 동시검출기법 개발 대상 LMO 이벤트 표준물질 확보 목록 27
표 7. 확보 및 순수 분리된 genomic DNA 순도 및 농도 정량 28
표 8. 17개 LMO 이벤트 염기서열 정보 수집 및 분석 결과 33
표 9. 17개 LMO 이벤트 특이적 프라이머 염기서열 및 생성물 크기 정보 36
표 10. LM 유채 5개 이벤트 프라이머, 생성물 크기, 동시검출 최적 반응 농도 40
표 11. LM 면화 2개 이벤트(set 1) 프라이머, 생성물 크기, 동시검출 최적 반응 농도 42
표 12. LM 면화 4개 이벤트(set 2) 프라이머, 생성물 크기, 동시검출 최적 반응 농도 43
표 13. LM 콩 6개 이벤트 프라이머, 생성물 크기, 동시검출 최적 반응 농도 44
그림 1. JRC-IRMM(SIGMA Korea)으로 부터 확보한 17개 LMO 표준물질 15
그림 2. AOCS(Biofact)로 부터 확보한 30개 LMO 표준물질 17
그림 3. 국립환경과학원 이관 LMO 표준물질 및 이벤트 특이적 프라이머 셋트 18
그림 4. 정제된 LMO genomic DNA와 순수분리, 확인 및 정량을 위한 기기 19
그림 5. LM 작물과 관련한 특성 및 유전정보 제공처 22
그림 6. LMO 17개 동시검출을 위한 이벤트 특이적 프라이머 확보 및 반응에... 23
그림 7. 최적 PCR반응 조건의 예 24
그림 8. JRC-IRMM과 AOCS로부터 확보한 17개 LMO 이벤트 표준물질 28
그림 9. 17개 LMO 이벤트 표준물질로부터 순수 분리된 genomic DNA 29
그림 10. LMO 표준물질 DNA 및 내재유전자 프라이머를 이용한 PCR 반응... 30
그림 11. 17개 LMO 이벤트의 도입유전자 구성정보 및 프라이머 위치 32
그림 12. 유채 5 이벤트의 특이적 PCR을 통한 프라이머 작동 유무 검증 37
그림 13. 면화 6 이벤트의 특이적 PCR을 통한 프라이머 작동 유무 검증 38
그림 14. 콩 6 이벤트의 특이적 PCR을 통한 프라이머 작동 유무 검증 39
그림 15. LM 유채 5 이벤트의 동시검출을 위한 최적 PCR 반응 조건 및 결과 41
그림 16. LM 면화 2 이벤트(set 1)의 동시검출을 위한 최적 PCR 반응 조건 및 결과 42
그림 17. LM 면화 4 이벤트(set 2)의 동시검출을 위한 최적 PCR 반응 조건 및 결과 43
그림 18. LM 콩 6 이벤트의 동시검출을 위한 최적 PCR 반응... 45
그림 19. 2014년 중점관리대상지역 모니터링 시료(면화)에 실제 적용실험 결과 47