[표지]
요약문
목차
Abstract 14
I. 서론 15
II. 연구내용 및 방법 34
1. LMO 6개 이벤트 표준물질에서 유전자 확보 34
가. LMO 검출을 위한 표준물질 확보 34
나. LMO 6개 이벤트 표준물질로부터 genomic DNA 순수 분리 및 검증 36
2. LMO 6개 이벤트 유전정보 확보 38
가. 동시검출기법 개발 대상 LMO의 유전 정보수집 38
3. PCR 생성물 크기에 따른 프라이머 제작 및 작동 유무 확인 40
가. PCR 생성물 크기에 따른 프라이머 제작 40
나. 제작된 프라이머의 작동 유무 검증 40
4. 최적 동시검출(multiplex-PCR) 조건 확립 41
가. LMO 검출을 위한 multiplex-PCR 조건 수립 41
나. 개발된 multiplex-PCR법의 효율성 입증 42
III. 연구결과 및 고찰 45
1. LMO 6개 이벤트 표준물질에서 유전자확보 45
가. LMO 검출을 위한 표준물질 확보 46
나. LMO 6개 이벤트 genomic DNA 순수 분리 및 검증 50
2. LMO 6개 이벤트 유전정보 확보 52
가. 도입유전자의 특성 및 주변염기서열 정보 확보 52
3. PCR 생성물 크기에 따른 프라이머 제작 및 작동 유무 확인 55
가. PCR 생성물 크기에 따른 프라이머 제작 55
나. 제작된 프라이머의 작동 유무 검증 56
4. 최적 동시검출(multiplex-PCR) 조건 확립 57
가. 반응액 중 각 프라이머의 최적 농도 및 반응온도 결정 57
나. 개발된 multiplex-PCR법의 효율성 입증 60
IV. 결론 및 제언 64
참고문헌 66
부록 70
1. 연구성과 70
2. 중간평가 평가의견 반영 사항 73
표 1. 2014년 국가별 세계 유전자변형작물 재배 현황 16
표 2. 2014년 세계 유전자변형작물 재배 비율 17
표 3. 양곡연도별 자급률 19
표 4. 양곡연도에 따른 곡물별 국내 자급률 현황 19
표 5. 연도별 국내 곡물 수입실적 통계 20
표 6. 연도별 위해성심사승인 현황 20
표 7. 국내 LMO 위해성 심사 승인 현황(2015년 10월 기준) 21
표 8. Glyphosate 저항성 LM콩과 재배콩 간 자연교잡율 27
표 9. 국가별 유채(Brassica napus L.)의 권장 이격거리 28
표 10. 국립생태원 LMO 유전자 분석법 확보 현황 32
표 11. 2015년 JRC-IRMM 구입 표준물질 목록 34
표 12. 2015년 AOCS 구입 표준물질 목록 35
표 13. 콩, 면화의 내재유전자 검출 프라이머 및 이를 증폭할 수 있는 검출 조건 37
표 14. PCR 증폭을 위한 혼합 반응액의 반응 조건 38
표 15. 검출율 확인을 위해 사용된 PCR taq polymerase의 종류 44
표 16. 2015년 동시검출기법 개발 대상 LMO 이벤트 표준물질 확보 목록 46
표 17. 국립생태원 LMO 이벤트 표준물질 확보 현황 (~ 2015) 47
표 18. 확보 및 순수 분리된 genomic DNA 순도 및 농도 정량 50
표 19. 6개 LMO 이벤트 염기서열 정보 수집 및 분석 결과 53
표 20. 6개 LMO 이벤트 특이적 프라이머 염기서열 및 생성물 크기 정보 55
표 21. LM 콩 4개 이벤트 프라이머, 생성물 크기, 동시검출 최적 반응 농도 58
표 22. LM 면화 2개 이벤트 프라이머, 생성물 크기, 동시검출 최적 반응 농도 59
그림 1. 2014년 국가별 유전자변형작물 재배지도 15
그림 2. 국내 LMO 수입현황 18
그림 3. 2014년 국내 작물별 LMO 수입량 18
그림 4. 국립생태원 LMO 자연환경 모니터링 및 사후관리 조사 지역 30
그림 5. 모니터링 결과 발견된 LMO 작물 및 사후 조치 30
그림 6. 국립생태원 LMO 자연환경 모니터링 및 의심시료 판별 체계 31
그림 7. JRC-IRMM으로 부터 확보한 2개 LM 면화 표준물질 35
그림 8. AOCS로 부터 확보한 4개 LM 콩 표준물질 36
그림 9. 정제된 LMO genomic DNA와 순수분리, 확인 및 정량을 위한 기기 37
그림 10. LM 작물과 관련한 특성 및 유전정보 제공처 39
그림 11. LMO 6개 동시검출을 위한 이벤트 특이적 프라이머 확보 및 반응에 필요한... 40
그림 12. 최적 PCR반응 조건의 예 41
그림 13. PCR 반응에 사용된 taq polymerase 종류 43
그림 14. JRC-IRMM과 AOCS로부터 확보한 6개 LMO 이벤트 표준물질 46
그림 15. 6개 LMO 이벤트 표준물질로부터 순수 분리된 genomic DNA 51
그림 16. LMO 표준물질 DNA 및 내재유전자 프라이머를 이용한 PCR 반응 적합도... 51
그림 17. 6개 LMO 이벤트의 도입유전자 구성정보 및 프라이머 위치 53
그림 18. 콩 4 이벤트의 특이적 PCR을 통한 프라이머 작동 유무 검증 56
그림 19. 면화 2 이벤트의 특이적 PCR을 통한 프라이머 작동 유무 검증 57
그림 20. LM 콩 4 이벤트의 동시검출을 위한 최적 PCR 반응 조건 및 결과 58
그림 21. LM 면화 2 이벤트의 동시검출을 위한 최적 PCR 반응 조건 및 결과 60
그림 22. LM 콩 tetraplex PCR 민감도 검정 결과 61
그림 23. LM 면화 duplex PCR 민감도 검정 결과 62
그림 24. Taq polymerase에 따른 검출율 검정 결과 63