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표제지
목차
I. 서론 9
II. 문헌 고찰 12
III. 재료 및 방법 14
1. 실험재료 14
2. 생더덕과 찐더덕의 추출 및 분획방법 14
1) 생더덕과 찐더덕의 제조 14
2) 시료 추출 15
3) 추출물의 분획 15
3. 생더덕과 찐더덕의 acetylcholinesterase 활성 저해능(TLC bio-assay(52)) 15
4. 실험동물을 통한 생더덕과 찐더덕의 추출물 및 분획물의 뇌허혈 시 신경세포보호 효능 측정 18
1) 실험동물의 사육 18
2) 해마조직의 염색 18
3) NeuN(a neuronal specific nuclear protein) 반응 및 Fluoro-Jade B를 이용한조직의 형광염색 20
4) 아교세포 활성변화 측정 22
5) 통계 23
5. HPLC (high pressure liquid chromatography) 24
6. 물질 분리 및 정제 26
1) Silica gel open column chromatography 26
2) Sephadex column chromatography 26
7. 지표 성분의 구조 분석 26
1) NMR (Nuclear Magnetic Resonance) 26
2) DEPT(Distoritionless Enhancement by Polarization Transfer) 27
3) GC-MS (Gas Chromatograph-Mass Spectrometer) 28
IV. 결과 및 고찰 29
1. 생더덕과 찐더덕 분획물의 수율 29
2. 생더덕과 찐더덕의 추출물 및 분획물의 acetylcholinesterase 활성 저해능 검색 (TLC bio-assay(52)) 32
3. 실험동물을 통한 생더덕과 찐더덕의 추출물 및 분획물의 뇌허혈 시 신경세포보호 효능 측정 34
1) 해마조직의 염색 34
2) NeuN(a neuronal specific nuclear protein) 반응 및 Fluoro-Jade B를 이용한조직의 형광염색 38
3) 아교세포 활성변화 측정 40
4. 생더덕과 찐더덕의 추출물과 분획물의 성분 차이 43
5. 찐더덕 EtOAc 분획물의 지표 물질 분리 46
1) Silica gel open column chromatography 46
2) Sephadex column chromatography 47
3) 지표 성분 구조분석 49
V. 결론 56
VI. 참고문헌 57
Abstract 66
Table 1. Instrument and Operating condition of HPLC for analysis of compounds from raw Codonopsis lanceolata and steamed Codonopsis lanceolata. 25
Table 2. The comparison area of raw Codonopsis lancolata and steamed Codonopsis lanceolata from 70% EtOH extract and EtOAc fraction. 45
Fig. 1. Reaction of acetylcholinesterase with 1-naphthyl acetate and the subsequent formation of the purple dye in the TLC bioassay. 17
Fig. 2. Raw Codonopsis lanceolata(left) and Steamed Codonopsis lanceolata(right). 30
Fig. 3. Extraction and isolation procedures of Codonopsis lanceolata 31
Fig. 4. Inhibition effect of raw Codonopsis lanceolata and steamed Codonopsis lanceolata extract and fraction on acetylcholinesterase acticity. (TLC bio-assay) 33
Fig. 5. CV staining in the sham(A and B), vehicle-(C and D), and ECLs-ischemia(E-X) groups at 4 days post-ischemia. In the Raw and Stemed Codonopsis lanceolata EtOAc groups, many CV+ neurons are detected. Bar＝800 μm(A,C,E,G,I,K,M, O,Q,S,U, and W), 50μm(B,D,F,H,J,L,N,P,R,T,V, and X). 36
Fig. 8. IB4 immunohistochemistry in the sham (A and E), vehicle- (B and F), EERCL- (C and G), and EESCL-ischemia (D and H) groups at 4 days postischemia. Bar＝50 μm. 41
Fig. 10. HPLC chromatograms of raw Codonopsis lanceolata and stemed Codonopsis lanceolata from 70% EtOH extract and EtOAc fraction. 44
Fig. 11. Analytical HPLC chromatograms of steamed Codonopsis lanceolata EtOAc fraction, subfraction E7, E7-1, and E7-1-11. 48
Fig. 12. ¹H-NMR spectrum of compound 7-1-11. 49
Fig. 13. ¹³C-NMR spectrum of compound 7-1-11. 50
Fig. 14. DEPT spectrum of compound 7-1-11. 51
Fig. 15. GC-Mass spectrum of compound 7-1-11. 52
Fig. 16. Chemical structure of 2-furoic acid 54
Fig. 17. Column chromatographic procedure and the yield of subfractions obtained from steamed Codonopsis lanceolata EtOAc fraction. 55
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