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표제지
목차
국문요약 8
I. 서론 9
II. 재료 및 방법 11
1. 세포주 및 배양 배지 11
2. EB (Embryoid Body)로의 분화 배지 및 방법 11
3. 계대배양 시 미분화율 측정 11
4. Alkaline Phosphatase 염색 12
5. 형광 면역염색 (Immunostaining) 12
6. qRT-PCR을 이용한 유전자 발현 분석방법 13
7. 콜로니들의 크기와 개수 측정 14
8. 핵형 분석 (Karyotyping) 14
III. 결과 16
1. 지지세포를 사용하지 않고 히스톤 탈아세틸효소 저해제를 이용한 인간배아줄기세포와 유도만능줄기세포의 배양 16
2. 히스톤 탈아세틸효소 저해제를 포함하는 배지에서 배양된 인간만능줄기세포의 증식효율 비교 19
3. 히스톤 탈아세틸효소 저해제를 첨가한 배지에서 배양된 인간 만능줄기세포에서의 미분화 및 분화 표지 (marker)들의 발현여부 22
4. 히스톤 탈아세틸효소 저해제를 첨가한 배지에서 배양된 인간 만능줄기세포의 분화능 분석 29
5. 핵형분석 (Karyotyping) 31
IV. 결론 33
참고문헌 35
Abstract 38
Table1. Primer sequenced for RT-PCR & qRT-PCR experiments. 14
Figure 1. The effects of HDAC inhibitors on the feeder-free growth of human pluripotene stem cells. 18
Figure 2. Comparison of the cell size of H9-hESC and iPS colonies under different feeder-free culture conditions. 20
Figure 3. Comparison of total cell number of the hESC and iPSCs under different feeder-free culture conditions. 21
Figure 4. Characterization of hESCs grown in the three HDACi-containing media by immunostaining. 25
Figure 5. Characterization of hiPSCs grown in the three HDACi-containing media by immunostaining. 27
Figure 6. qRT-PCR analysis for the expression of several undifferentiation and differentiation markers from hPSCs cultured in the HDACi-containing feeder-free conditions 28
Figure 7. Immunostaining of three germ later markers in H9-hESCs and iPSCs after spontaneous differentiation in vitro. 30
Figure 8. Karyotype analysis of the hESCs after 5 passages in three HDACi-containing hESC media. 32
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