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표제지
목차
초록 12
PART I. Transesterification of plant oils using Staphylococcus haemolyticus L62 lipase displayed on Escherichia coli cell surface using the OmpA signal peptide and EstA8β anchoring motif 14
초록 15
서론 17
재료 및 방법 25
1. 플라스미드 DNA의 구성 및 제작 25
2. 균주 및 배양 조건 26
3. 세포 표면 발현 L62 리파아제의 활성 확인 26
4. 외막의 분리 27
5. L62 리파아제의 발현량 측정 28
6. 면역형광법과 유세포분석법 29
7. 세포 표면 발현 L62 리파아제의 생화학적 특성 규명 30
8. 바이오디젤의 생산 32
결과 및 고찰 35
1. 세포 표면 발현 벡터의 제조 및 확인 35
2. 발현된 SHL62 리파아제의 위치 확인 37
3. IPTG의 농도와 발현시간에 따른 고정화 SHL62 리파아제 활성 42
4. 세포 표면 발현 SHL62 리파아제의 생화학적 특성 규명 44
5. 세표 표면 고정화 SHL62 리파아제를 이용한 바이오디젤의 생산 49
참고문헌 56
PART II. Interesterification of Ethyl cinnamate with Triolein using Immobilized K80 lipase originated from Proteus vulgaris and characterization of their biochemical properties 62
초록 63
서론 65
재료 및 방법 70
1. 재료 70
1. 재조합 Proteus vulgaris K80 리파아제의 생산 70
2. PVK80 리파아제의 MA-DVB 담체 고정화 71
3. 세포 추출액 및 고정화 Proteus vulgaris K80 리파아제의 활성 측정 72
4. 고정화 PVK80 리파아제를 이용한 Cinnmoyl lipid의 합성 73
5. 반응용액의 분석 75
6. HR-MS를 통한 생산물의 분자량 분석 76
7. CMOG와 CDOG의 유기용매상에서의 항산화 활성 측정 77
8. CMOG와 CDOG의 에멀션상에서의 항산화 활성 측정 79
결과 및 고찰 81
1. Interesterification 반응산물의 규명 81
2. Cinnamoyl lipids 합성 반응에서 유기 용매의 영향 85
3. Cinnamoyl lipids 생산수율에 대한 기질 농도 비율의 영향 91
4. Cinnamoyl lipids의 생산수율에 대한 molecular sieve의 영향 93
5. Cinnamoyl lipid의 항산화 활성 97
참고문헌 112
ABSTRACT 119
Table. 1. The organic solvent effect on the enzymatic transesterification... 86
Table. 2. The organic solvent effect on the enzymatic transesterification... 90
Part I. Transesterification of plant oils using Staphylococcus haemolyticus L62 lipase displayed on Escherichia coli cell surface using the OmpA signal peptide and EstA8β anchoring motif 20
Fig. 1. The reaction scheme catalyzed by lipases 20
Fig. 2. Immobilization of enzyme. Immobilization methods are devided in... 22
Fig. 3. Schematic representation of the pOmpA-Tu::L62 (A), the... 36
Fig. 4. Analysis using flow cytometry and optical and fluorescence... 39
Fig. 5. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (A)... 41
Fig. 6. Displayed SHL62 activity according to induction time (A) and... 43
Fig. 7. Effect of temperature and pH on displayed SHL62 lipase 46
Fig. 8. Substrate specificity of the displayed SHL62 lipase toward... 48
Fig. 9. The effects of various alcohols and methanol concentration on... 51
Fig. 10. Transesterification of plant oils using displayed SHL62 cells 53
Part II. Interesterification of Ethyl cinnamate with Triolein using Immobilized K80 lipase originated from Proteus vulgaris and characterization of their biochemical properties 82
Fig. 1. Chromatogram of high-performance liquid chromatography... 82
Fig. 2. The reaction scheme of interesterification reaction using ethyl... 84
Fig. 3. The effect of substrate concentration on bioconversion yield... 88
Fig. 4. The results of interesterification reaction for 72h using... 92
Fig. 5. The results of interesterification reaction for 72h according to... 95
Fig. 6. Time course for interesterification of ethyl cinnamate with... 96
Fig. 7. The result of DPPH assay using cinnamoyl lipid in methanol as... 98
Fig. 8. The result of DPPH assay using cinnamoyl lipid in... 100
Fig. 9. Lipid peroxidation process. prooxidants take the allylic hydrogen... 102
Fig. 10. Time course for conjugated diene (A) and triene (B) formation... 104
Fig. 11. The amount of conjugated diene (A) and triene (B) after lipid... 107
Fig. 12. The result of ABTS assay using cinnamoyl lipid in ethanol (A)... 109
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