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표제지

국문요약

목차

I. 서론 13

II. 재료 및 방법 15

2.1. 시약 15

2.2. 박테리아 균주 및 액체 배양 조건 15

2.3. 박테리아 균주 및 Biofilm 배양 조건 15

2.4. Dendropanax morbifera추출물 16

2.5. Top agar assay 16

2.6. DPL1 추출물의 pH, 온도 안전성 확인 17

2.7. DPL1 추출물의 항균효과 검정 17

2.8. Resorufin assay를 이용한 Biofilm 내 세균 생존 능력 평가 17

2.9. Crystal violet staining 18

2.10. Motility assay : Swimming and swarming motility 18

2.11. LIVE/DEAD bacterial viability assay 19

2.12. Confocal Laser Scanning Microscopy(CLSM) 19

2.13. Scanning Electron Microscopy(SEM) 20

2.14. 통계분석 20

III. 결과 22

3.1. Dendropanax morbifera추출물의 분획 22

3.2. Dendropanax morbifera추출물이 S. aureus의 성장 억제 효과 22

3.2.1. 전체 Dendropanax mobifera분획물이 S. aureus성장에 미치는 영향 22

3.2.2. Top agar assay 23

3.2.3. Dendropanax morbifera추출물이 S. aureus의 성장에 미치는 영향 23

3.2.4. Scanning Electron Microscopy(SEM) 24

3.3. DPL1 추출물의 S. aureus에 biofilm 환경에서의 항균 효과 검증 24

3.3.1. S. aureus biofilm 환경에서의 DPL1 추출물 처리가 미치는 효과 24

3.3.2. S. aureus biofilm 형성 후, 처리 시간에 따른 효과 25

3.3.3. Motility assay : swimming and swarming motility 26

3.3.4. DPL1 추출물이 biomass에 미치는 효과 확인 26

3.3.5. LIVE/DEAD Bacterial Viability assay 27

3.3.6. DPL1 추출물이 S. aureus biofilm 내부의 침투 효과 관찰 27

3.3.7. Scanning electron microscopy(SEM) 28

3.4. S. aureus biofilm에 대한 DPL1 추출물과 kanamycin의 조합처리 29

3.4.1. 항생제가 S. aureus biofilm에 미치는 영향 29

3.4.2. Kanamycin 처리가 S. aureus 생장에 미치는 효과 29

3.4.3. DPL1 추출물과 kanamycin 조합처리가 S. aureus생장에 미치는 효과 30

3.4.4. DPL1 추출물과 kanamycin 조합처리가 S. aureus biofilm에 미치는 효과 30

3.4.5. LIVE/DEAD Bacterial viability assay에 의한 DPL1 추출물과 kanamycin의 세포 활성 측정 31

3.5. Hexa-peptides가 S. aureus에 대한 항균 효과 검정 54

3.6. Hexa-peptides가 S. aureus biofilm에 미치는 효과 검정 54

3.6.1. Hexa-peptides 처리가 S. aureus biofilm에 미치는 변화 측정 54

3.6.2. Hexa-peptides의 농도 변화에 따른 S. aureus biofilm에 미치는 효과 검정 55

3.6.3. Hexa-peptides의 시간 변화에 따른 S. aureus biofilm에 미치는 효과 검정 56

3.6.4. LIVE/DEAD Bacterial Viability assay 56

3.6.5. Hexa-peptides가 S. aureus biofilm 내부의 침투력 효과 관찰 57

IV. 고찰 67

V. 참고문헌 72

VI. 영문요약 75

List of Tables

Table 1. Ten hexa-peptides selected based on PS-SPCL. 58

List of Figures

Figure 1. A schematic diagram of fractionation by polarity from Dendropanax morbifera total extract. The most highly... 21

Figure 2. The inhibitory effect of the total DPL extract in the liquid cultured S.... 33

Figure 3. Effect of pH on DPL1 was incubated at the various pH conditions.... 34

Figure 4. Effects of temperature on DPL1. DPL1 was incubated at the various... 35

Figure 5. Quantitation of inhibition zones on LB agar plate following exposure... 36

Figure 6. The inhibitory effect of the DPL1 extract in the liquid cultured S. aureus.... 37

Figure 7. SEM micrographs of the bacterial cells treated with DPL1 extract. Compared with the untreated control, the S.... 38

Figure 8. The inhibitory effect of DPL1 extract against biofilm of S. aureus using... 39

Figure 9. The inhibitory effect of DPL1 extract against biofilm of S. aureus using... 40

Figure 10. Swimming motility of S. aureus on a... 41

Figure 11. Swarming motility of S. aureus. The... 42

Figure 12. Biofilm growth was assessed by crystal violet staining. 43

Figure 13. Inhibitory efficacy of DPL1 extract on biofilm of S.... 44

Figure 14. CLSM imaging analysis on biofilms of S. aureus after... 45

Fiqure 15. SEM microaraphs of S. aureus biofilm treated with DPL1 extract. Compared with the untreated control, the S.... 46

Figure 16. Activities of antibiotics against biofilm of S. aureus. Concentration-response activities of antibiotics against 12h... 47

Figure 17. The time-kill curve of kanamycin against the standard S. aureus. The growth... 48

Figure 18. Combination of antibiotic and DPL1 extract in the liquid cultured S. aureus. In order to maximize the antimicrobial... 49

Figure 19. Combination of antibiotics and DPL1 extract against biofilm of S.... 50

Figure 20. LIVE/DEAD Bacterial Viability assay... 52

Figure 21. LIVE/DEAD Bacterial Viability assay... 53

Figure 22. In order to choose the peptides for further study, the inhibition effect... 59

Figure 23. The inhibitory effect of hexa-peptide against biofilm of S. aureus using resorufin assay and colony counting.... 60

Figure 24. The inhibitory effect of hexa-peptide against biofilm of S. aureus... 61

Figure 25. The inhibitory effect of hexa-peptide against biofilm of S. aureus... 62

Figure 26 . Inhibitory efficacy of KCM11 on biofilm of S.... 63

Figure 27. Inhibitory efficacy of KCM21 on biofilm of S.... 64

Figure 28. CLSM imaging analysis on biofilms of S. aureus after the... 65

Figure 29. CLSM imaging analysis on biofilms of S. aureus after the... 66

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