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요약문
Summary
칼라
목차
제1 세부과제 : 곤충 유래 탄수화물 대사 관련 유전자의 탐색 및 확보 37
요약문 39
Summary 43
목차 49
제1장 서론 51
제2장 재료 및 방법 58
1. 유용곤충자원의 확보 58
2. Total RNA 및 mRNA의 추출 58
3. cDNA library의 제조 59
4. Genomic library의 제조 59
5. PCR primer의 설계 및 제조 60
6. PCR 반응의 수행 60
7. cDNA 클로닝 61
8. In vivo excision 및 sequencing 61
9. Genomic DNA 클로닝 61
10. Lambda DNA의 분리 62
11. Southern hybridization 62
제3장 결과 및 고찰 64
1. 유용곤충자원의 확보 64
2. 유용곤충의 cDNA library 제조 64
3. 유용곤충의 genomic library 제조 64
4. Cloning of Insect Chitinase gene 65
1) PCR cloning of Insect Chitinase gene 65
2) 곤충의 chitinase 유전자의 cDNA 클로닝 68
① 흰불나방으로부터 chitinase 유전자의 cDNA 클로닝 68
② 집누에나방으로부터 chitinase 유전자의 cDNA 클로닝 68
5. 곤충으로부터 trehalase 유전자의 클로닝 73
1) 곤충으로부터 trehalase 유전자의 PCR 클로닝 73
2) 곤충의 trehalase 유전자의 Genomic 클로닝 76
① 흰불나방으로부터 trehalase 유전자의 genomic 클로닝 76
② 흰점박이꽃무지로부터 trehalase 유전자의 genomic 클로닝[원문불량;p.76] 76
제2 세부과제 : 인체유래 질환 및 당대사 관련 유전자의 탐색 및 확보 85
요약문 87
목차 91
제1장 서론 93
제2장 실험재료 및 방법 94
1.cDNA probe의 제조 94
2. Human genomic library의 탐색 95
3. 제한효소지도의 작성 95
4. Subcloning 및 염기서열 결정 95
제3장 실험결과 및 고찰 96
1. cDNA probe의 제조 96
2. GnT-III 클론의 분리 및 제한효소지도의 작성 96
제4장 참고문헌 99
제3 세부과제 : 질환모델동물의 당대사 관련 유전자 탐색 및 검정법 개발 103
요약문 105
SUMMARY 109
목차 113
제1장 서론 115
제2장 재료 및 방법 117
1. 당대사 질환모델동물 117
2. 질환모델동물의 형질검정 118
3. 당대사 관련유전자의 탐색 121
제3장 결과 및 고찰 122
1. 당대사 질환모델동물의 탐색 122
2. 당대사이상동물의 유전학적 형질검정 및 검정법 확립 124
3. 당대사 모델동물의 혈액생화학적 분석 125
4. 당 대사 관련 유전자의 탐색 125
제4장 참고문헌 127
제4 세부과제 : 미생물 유래 당대사관련 유전자의 탐색 및 검정법 개발 129
요약문 131
SUMMARY 135
목차 139
제1장 서론 141
제2장 재료 및 방법 148
1. 사용균주 및 플라스미드 148
2. 배지 149
3. 사용시약 및 효소의 반응 조건 149
4. 플라스미드 DNA의 분리 149
5. Agarose gel 전기영동 149
6. 형질전환 149
7. 접합전달 150
8. Southern blotting 150
9. Zymogram staining 151
10. Z. mobilis 균체외 levansucrose 의 정제 151
10-1. 효소액의 조제 151
10-2. 1st ammonium sulfate precipitation 151
10-3. 음이온 교환 크로마토그라피 152
10-4. 흡착 크로마토그라피 152
10-5. 2nd ammonium sulfate precipitation 152
10-6. Superose 6 gel 여과 크로마토그라피 152
11. 정제된 levansucrose 의 효소특성연구 152
11-1. 효소활성에 미치는 pH 의 영향 153
11-2. 염 및 유기시약의 영향 153
11-3. 분자량 결정 153
12. 분석 방법 153
12-1. 단백질의 정량 153
12-2. Levansucrase의 효소활성 측정 153
13. Levan의 정제 및 분석 154
13-1. Levan의 정제 154
13-2. TLC와 HPLC에 의한 분석 154
제3장 실험 결과 155
1. Z. mobilis sucrose가수분해효소의 탐색 및 검정 155
2. Z. mobilis로부터 levansucrase의 정제 158
2-1. 조효소액의 조제 158
2-2. 분별침전 160
2-3. 음이온 교환 크로마토그라피 160
2-4. 흡착 크로마토그라피 162
2-5. 2차 분별침전 162
2-6. Superose 12 gel 여과 크로마토그라피 162
3. 정제된 levansucrase의 특성조사[원문불량;p.163] 162
3-1. 효소활성에 미치는 pH의 영향 167
3-2. 여러가지 화합물 및 금속이온에 의한 영향 167
3-3. Levansucrase의 분자량 170
4. E. coli에서 Z. mobilis의 sucrase(sucrose) 가수분해 효소유전자의 클로닝과 발현 170
4-1. Sucrase 가수분해 효소유전자의 클로닝 170
4-2. 클로닝된 sucrase 가수분해 효소유전자의 유래확인 173
4-3. E. coli에서 생성된 polymer의 동정[원문불량;p.176] 173
4-4. 결손변이주의 제조 및 sucrase 가수분해 효소 유전자의 위치 추정 179
5. 클론 pZL8에 도입된 sucrose가수분해 효소유전자의 재클로닝과 Z. anaerobia에서의 발현 179
제4장 결론 185
참고문헌 186
제5 세부과제 : 탄수화물대사 관련 유전자 도입에 의한 작물의 품종개량 191
요약문 193
Summary 197
목차 203
제1장 총론 207
제2장 체세포배발생에 의한 한국품종 고구마의 고빈도 식물체 재분화 208
제1절 서론 208
제2절 재료 및 방법 209
제3절 결과 및 고찰 210
제3장 아프리카 품종 카사바의 경단분열 조직 배양에 의한 체세포배발생과 식물체재분화 217
제1절 서론 217
제2절 재료 및 방법 218
제3절 결과 및 고찰 220
제4장 무 (Raphanus sativus L.)의 체세포배발생을 통한 식물체재분화 228
제1절 서론 228
제2절 재료 및 방법 228
제3절 결과 230
제4절 고찰 232
제5장 Agrobacterium에 의한 더덕의 형질전환 및 식물체 재분화 238
제1절 서론 238
제2절 재료 및 방법 238
제3절 결과 240
제4절 고찰 242
제6장 고구마의 ADP-Glucose Pyrophosphorylase Small Subunit 유전자의 cDNA 클로닝과 발현양상 247
제1절 서론 247
제2절 재료 및 방법 248
제3절 결과 251
제4절 고찰 255
[title page etc.]
Contents
1st Sub-research : Cloning of the Genes Related to Carbohydrate Metabolism from Insect 37
Contents 47
1. Introduction 51
2. Materials and Methods 58
2-1. Conservation of insect resources 58
2-2. Isolation of total RNA and mRNA 58
2-3. preparation of cDNA library 59
2-4. Preparation of genomic library 59
2-5. Preparation of PCR primer 60
2-6. PCR reaction 60
2-7. Cloning of cDNA 61
2-8. In vivo excision and sequencing 61
2-9. Cloning of genomic DNA 61
2-10. Isolation of lambda DNA 62
2-11. Southern hybridization 62
3. Results and Discussion 64
3-1. Conservation of insect resources 64
3-2. Preparation of cDNA libraries of insects 64
3-3. Preparation of genomic libraries of insects 64
3-4. Cloning of insect chitinase genes 65
1) PCR cloning of insect chitinase genes 65
2) cDNA cloning of insect chitinase genes 68
① cDNA cloning of Hyphantria cunea chitinase gene 68
② cDNA cloning of Bombyx mori chitinase gene 68
3-5. Cloning of insect trehalase(traehalase) genes 73
1) PCR cloning of insect trehalase genes 73
2) Genomic cloning of insect trehalase genes 76
① Genomic cloning of Hyphantria cunea trehalase genes 76
② Genomic cloning of Protaetia brevitarsis trehalase genes[원문불량;p.76] 76
2nd Sub-research : Cloning of the Related to Carbohydrate Metabolism as well as the Human Diseases 85
3rd Sum-research : A Study of Glucose Metabolism Gene on Animal Models for Human Disease 103
4th Sub-research : Development of Methods for Screening and Identification of Genes related to Microbial Sugar Metabolism 129
Contents 137
Chapter I. Introduction 141
Chapter II. Materials and Methods 148
1. Strains and plasmids 148
2. Media and cell cultivation 149
3. Reagents, enzymes and reaction conditions 149
4. Purification of plasmid DNA 149
5. Agarose gel electrophoresis 149
6. Transformation 149
7. Conjugation 150
10. Purification of levansucrase from Z. mobilis 151
1. preparation of crude enzyme solution 151
2. 1st ammonium sulfate precipitation 151
3. Ion-exchange chromatography 152
4. adsorption chromatography 152
5. 2nd ammonium sulfate precipitation 152
6. gel filtration on Superose 12. (FPLC) 152
11. Characteristics of purified levansucrase 152
1. Effect of pH 153
2. Effects of various chemicals and metal ions 153
3. Determination of MW 153
12. Analytical methods 153
1. Determination of protein concentration 153
2. Determination of levansucrase activity 153
13. Purification and analysis of levan 154
1. Purification of levan 154
2. TLC and HPLC analysis 154
Chapter III. Results and Discussion 155
1. Screening and identification of saccharolytic enzymes from Z. mobilis 155
2. Purification of levansucrase from Z. mobilis 158
2-1. preparation of crude enzyme solution 158
2-2. 1st ammonium sulfate precipitation 160
2-3. ion-exchange chromatography 160
2-4. adsorption chromatography 162
2-5. 2nd ammonium sulfate precipitation 162
2-6. gel filtration on superose 12 (FPLC) 162
3. Characteristics of purified levansucrase[원문불량;p.163] 162
3-1. Effect of pH 167
3-2. Effect of metal ions and chemicals 167
3-3. MW determination of levansucrase 170
4. Cloning and expression of saccharolytic enzymes from Z. mobilis in E. coil 170
4-1. Cloning of genes encoding saccharolytic enzymes 170
4-2. Southern blot analysis of cloned DNA fragment 173
4-3. Identification of polymer formed by E. coil[원문불량;p.176] 173
4-4. Construction and analysis of deletion clone 179
5. Subcloning and expression of cloned genes in Z. anaerobia 179
Chapter IV. Conclusion 185
References 186
5th Sub-research : Improvement of Crop Quality by Manipulating Carbohydrate Metabolism Related Genes 191
Contents 205
Chapter 1. Introduction 207
Chapter 2. High Frequency Somatic Embryogenesis and Plant Regeneration in Tissue Cultures of Korean Cultivar Sweet Potatoes 208
1. Introduction 208
2. Materials and Methods 209
3. Results and Discussion 210
4. Reference 212
Chapter 3. Somatic Embryogenesis and Plant Regeneration in Shoot Apical Meristem Cultures of an African Local Variety Cassava (Manihot esculenta Crantz) 217
1. Introduction 217
2. Materials and Methods 218
3. Results and Discussion 220
4. Reference 222
Chapter 4. Somatic embryogenesis and plant regeneration in tissue cultures of radish (Raphanus sativus L.) 228
1. Introduction 228
2. Materials and Methods 228
3. Results and Discussion 230
4. Reference 232
Chanter 5. Genetic Transformation and Plant Regeneration of Codonopsis lanceolata Using Agrobacterium 238
1. Introduction 238
2. Materials and Methods 238
3. Results and Discussion 240
4. Reference 242
Chapter 6. cDNA cloning and expression pattern of the ADP-glucose pyrophosphoryIase small subunit gene in sweet potato 247
1. Introduction 247
2. Materials and Methods 248
3. Results and Discussion 251
4. Reference 255
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