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표제지

머리말

목차

Ⅰ. 당구조 분석의 필요성 4

Ⅱ. 당사슬의 종류와 구조 10

Ⅲ. 발현시스템별 당사슬의 특성 12

1) 효모 14

2) 식물 15

3) 곤충 세포주 15

4) 포유류 세포주 16

Ⅳ. 당단백질 내 당화 확인 17

1) Differential deglycosylation with SDS-PAGE 18

2) Differential deglycosylation with MALDI-TOF 19

Ⅴ. 당단백질 내 성분당 조성 분석 21

1) HPAEC-PAD를 이용한 성분당 분석 22

2) HPLC를 이용한 표지된 성분당 분석 24

3) 성분당 검출방법 28

4) Sialic acid capping ratio 29

Ⅵ. 당단백질 내 당사슬 구조 분석 30

1) Exo-glycosidase array/순상 HPLC 31

2) 음이온 교환 HPLC 33

3) 2D HPLC 34

4) MALDI-TOF 35

Ⅶ. 당화 위치 확인 및 각 당화 위치에서의 당사슬 구조 분석 36

1) Glyco-mapping을 이용한 당화위치의 확인 36

2) Glyco-mapping/PNGase F 분석을 이용한 당화위치의 확인 39

Ⅷ. 부록 40

Ⅸ. 참고문헌 41

판권기 49

표목차

[표 1] 세계적 제약사들의 제품별 매출액 ($m) 8

[표 2] 당단백질의약품 및 개발 중인 당단백질 8

[표 3] 당화 비교 10

[표 4] Differential Deglycosylation 사용하는 효소와 기기 18

[표 5] 성분당 분석법의 장단점 비교 24

[표 6] 성분당 검출 방법 비교 28

[표 7] 당단백질 양에 따라 당사슬을 분리하기 위해 최적화된 시약들의 비율 32

[표 8] 주요 사용장비 및 방법 비교 35

그림목차

[그림 1] 당사슬 구조 분석을 위한 모식도 7

[그림 2] N-당사슬의 전형적인 구조들 11

[그림 3] O-당사슬의 전형적인 구조들 11

[그림 4] 재조합단백질을 생산하는 숙주시스템 비교 12

[그림 5] 효모, 식물, 곤충, 포유류에서의 N-glycan processing pathway 13

[그림 6] 효모 종에 따른 N-당사슬 구조 14

[그림 7] SDS-PAGE를 이용한 differential deglycosylation에 대한 모식도 18

[그림 8] SDS-PAGE를 이용한 differential deglycosylation 결과 19

[그림 9] MALDI-TOF를 이용한 differential deglycosylation에 대한 모식도 20

[그림 10] MALDI-TOF를 이용한 differential deglycosylation 결과 20

[그림 11] HPAEC-PAD를 이용한 성분당 분석 23

[그림 12] HPAEC-PAD를 이용한 시알산 분석 23

[그림 13] 2-AP를 이용한 성분당 표지 반응 25

[그림 14] HPLC를 이용한 2-AP 표지된 성분당 분석 25

[그림 15] PMP를 이용한 성분당 표지 반응 26

[그림 16] HPLC를 이용한 PMP 표지된 성분당 분석 26

[그림 17] DMB를 이용한 시알산 표지 반응 27

[그림 18] HPLC를 이용한 DMB 표지된 시알산 분석 28

[그림 19] 당사슬 구조 분석 흐름도 30

[그림 20] Exo-glycosidase array/순상 HPLC를 이용한 당사슬 분석의 예시 33

[그림 21] 음이온 교환 HPLC을 이용한 당사슬 분석의 예시 34

[그림 22] 2D HPLC의 예시 34

[그림 23] MALDI-TOF를 이용한 당사슬 분석의 예시 35

[그림 24] Glyco-mapping을 이용한 당화 위치 확인의 예시 38

[그림 25] Glycopeptide의 당화 구조 확인의 예시 38

[그림 26] 당화 위치 확인의 예시 39

[그림 27] LC-MS를 이용한 당사슬 구조 분석 예시 (EPO의 Asn) 39

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