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제출문

보고서 초록

요약문

SUMMARY(영문요약문)

CONTENTS(영문목차)

목차

제1장 연구개발과제의 개요 10

제1절 연구개발의 목적 10

제2절 연구개발의 필요성 및 범위 10

1. 연구개발의 필요성 10

2. 연구 범위 (2단계) 12

제2장 국내외 기술개발 현황 13

제3장 연구개발수행 내용 및 결과 14

1. 뇌의 특정 영역에 제한하여 RNA 간섭을 유도하기 위한 바이러스 매개 siRNA 유전자 주입 시스템 개발 14

가. 연구 내용 14

나. 연구 결과 14

2. siPNA 발현용 렌티 바이러스 벡터 제조 및 기능 검증 15

가. 연구 내용 15

나. 연구 결과 15

3. 유도 및 추적성 siRNA 발현 렌티바이러스 벡터 제조 17

가. 연구 내용 17

나. 연구결과 17

4. 뇌신경세포로의 렌티바이러스 매개 유전자 전달 효율 확인 18

가. 연구 내용 18

나. 연구 결과 18

5. 신경세포 특이적 발현 promoter를 도입한 추적성 siRNA 발현 렌티바이러스 벡터 시스템 구축 20

가. 연구 내용 20

나. 연구 결과 20

6. 시상핵 기능 관련 유전자 생체내 기능 검증을 위한 Screening 수행 22

가. 연구 내용 22

나. 연구 결과 22

7. 뇌기능 관련 유전자 knock-down을 위한 siRNA target sequence 효과 검증 24

가. siRNA 발현용 렌티바이러스 벡터 제조 24

나. 신경세포 특이 추적성 siRNA 발현용 렌티바이러스 벡터의 효율성 검증 25

다. 마우스 세포주에서 PLCβ1 및 PLCβ4 유전자의 발현 확인 25

라. PLCβ1 및 PLCβ4 유전자 konck-down을 유도하는 siRNA target 선별 26

마. 1단계 프로테오믹스연구에서 발굴된 시상핵 기능 관련 유전자 knock-down을 위한 shRNA target sequences 검증 28

바. 신경세포 특이적 발현 promoter를 도입한 유도성 렌티바이러스 벡터 시스템 검증 31

8. 개체 수준에서 RNA 간섭에 의한 뇌기능 관련 유전자 knock-down 유도 및 효율 검증 33

가. 연구내용 33

나. 연구결과 33

제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 34

제1절 연구 개발 목표의 달성도 34

제2절 기술 발전에의 기여도 35

제5장 연구개발결과의 활용계획 36

1. 기술적 측면 36

2. 경제·산업적 측면 36

3./3) 실용화 실적 및 사업화 활용가능성 37

제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 38

제1절 해외과학기술정보 사례 38

제2절 해외과학기술정보 평가 38

제7장 참고문헌 39

List of Table

Table 1. Proteins of absence seizure related sensory prcessing in absence seizure mouse by differential proteomic analysis 23

Table 2. shRNA target sequence for PLC β1 knock-down 24

Table 3. shRNA target sequence for PLC β4 knock-down 25

List of Figure

Figure 1. The diagram of shRNA expression lentiviral vector, shLenti2.4G. 15

Figure 2. The EcoR V- Xho I enzyme digestion patterns. 16

Figure 3. p24 western blotting for measuring the amount of produced lentiviruses and eGFP expression of transduced HeLa cells(photographed under digital camera). 16

Figure 4. Target gene knock-down in vivo.... 16

Figure 5. The Expression of the eGFP in the Mouse Brain.... 17

Figure 6. Diagram of inducible siRNA letiviral vectors(문의) 17

Figure 7. Western blot of Tet R. 18

Figure 8. eGFP expression in the striatum after infection with lentiviral vectors. 18

Figure 9. eGFP expression in the striatum after 4weeks infection with lentiviral vectors. 19

Figure 10. eGFP expression in the striatum after treat with polybrene. 19

Figure 11. The nucleotide sequence of the 5' flanking region of the synapsin promoter. 20

Figure 12. Diagram of shLentiS-2.4G. 20

Figure 13. p24 westerm blot. 21

Figure 14. Comparison of eGFP expression of shLentiS-2.4G transduced HeLa cells(upper two panels photographed under CCD camera) and shLenti2.4G(below two panels photographed under digital camera). 21

Figure 15. Lentivitus-based eGFP expression in cortical neurons in vivo 21

Figure 16. In vivo infection of thalamus mediated by lentivirus containing synapsin-1 promoters 21

Figure 17. Three-dimensional images of neuronal cells infected by lentivirus containing synapsin-1 promoters 22

Figure 18. Identification of proteins of absence seizure related sensory processing in absence seizure mouse by differential proteomic analysis 23

Fig19/20. Identification of the efficacy of PLC β4 Ab in the mouse brain 23

Fig20/21. Identification of the efficacy of PLC β1 Ab in the mouse brain 24

Figure 21/23: RNAi effect for p53. 25

Figure 22/24. Transduction efficiency of C2C12 and NIH3T3 cells 26

Figure 23. shRNA target validation for PLCβ1 knock-down.... 26

Figure 24/26. shRNA target validation for PLCβ1 knock-down.... 27

Figure 25/26. shRNA target validation for PLCβ4 knock-down.... 27

Figure 26/27. shRNA target validation for PLCβ4 knock-down.... 27

Figure 27/28. Results of lentiviral vector system for tetracycline-regulated siRNA expression 32

Figure1. shRNA target validation for CRMP 2 knock-down. 29

Figure2. shRNA target validation for FSCIN knock-down. 30

Figure3. shRNA target validation for STIP 1 knock-down. 31

Figure4/5. Inducible RNAi effect for PLCβ1 32

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