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표제지
목차
Ⅰ. 최종결과보고서 요약문 5
간흡충란 검출용 래피드 진단키트 개발 5
Development of rapid diagnostic kit for Clonorchis egg detection 6
Ⅱ. 학술연구용역사업 연구결과 7
제1장 최종 연구개발 목표 7
1.1. 목표 7
가. 연구목적 및 필요성 7
나. 연구수행 체계 10
다. 공동연구 수행 필요성 11
1.2. 목표달성도 및 관련분야에 대한 기여도 11
가. 연구결과에 대한 기여도, 기대효과 및 활용방안 11
1.3. 국내ㆍ외 기술개발 현황 12
가. 국내ㆍ외 연구동향 (연구배경) 12
나. 연구 배경 12
제2장 최종 연구개발 내용 및 방법 14
2.1. 연구배경 14
2.2. 연구내용 14
2.3. 연구방법 14
1) 간흡충 충란 수집 14
2) 간흡충 양성 혈청 수집 15
3) 간흡충 충란 특이항원 정제 및 단클론항체 제작 15
4) 간흡충 충란 특이항체를 이용한 충란 진단 키트 제조 17
5) 간흡충 충란 진단키트 제조방법 18
제3장 최종 연구개발 결과 23
3.1. 연구개발 결과 23
1) 간흡충 충란 수집 23
2) 간흡충 양성 혈청 수집 23
3) 간흡충 충란 특이항원 정제 및 단클론항체 제작 23
4) 간흡충 충란 특이항체를 이용한 충란 진단 키트 제조 29
5) 간흡충 충란 진단키트 제조방법 30
6) 간흡충 충란 진단키트의 민감도 및 특이도 시험 33
7)/6) 현재 진행 사항 및 향후 추진 사항 39
제4장 연구결과 고찰 및 결론 39
제5장 연구성과 및 활용계획 43
5.1. 활용성과 43
5.2. 활용계획 44
제6장 기타 중요변경사항 45
제7장 연구비 사용 내역 45
제8장 참고문헌 46
제9장 첨부서류 47
표 1. 장내기생충 실태조사 연도별 감염현황 (질병관리본부, 2004) 7
표 2. 연도별 장내기생충 검사건수 및 양성률 (질병관리본부, 2009. 07) 8
표 3/표 4. 교차반응성 시험에 사용된 물질 목록 21
표 4/표 5. 교차반응성 시험에 사용된 검체 목록 21
표 5/표 6. 교차반응성 시험에 사용된 세균 목록 21
표 6/표 7. 바이러스들과의 교차반응성 시험에 사용된 바이러스 목록 22
표 7/표 8. ELISA를 이용한 fusion plate screening 결과 24
표 8/표 9. 24 well 세포배양용 용기에서 배양한 융합세포주 25
표 9/표 10. 24 well 세포배양용 용기에서 배양한 융합세포주의 ELISA 결과 25
표 10/표 11. 선정된 4종의 단클론항체의 항원성 27
표 11/표 12. 기존 제품과의 비교 실험 결과 30
표 12/표 13. 간흡충 충란 진단키트의 교차반응성 시험 36
표 13/표 14. 간흡충 충란 진단키트의 민감도 시험 37
표 14/표 15. 간흡충 충란 진단키트의 특이도 시험 37
표 15/표 16. 간흡충 충란 진단키트의 민감도 시험 39
표 16/표 17. 간흡충 충란 진단키트의 특이도 시험 39
그림 1. 면역점 측정법(immuno-dot assay)를 이용한 간흡충 충란-특이 단클론 항체의 선별 17
그림 2. 본 연구를 통해서 개발하고자하는 간흡충 충란 경쟁적 입자응집법 진단키트 18
그림 3. Strip assay를 이용한 fusion plate screening 및 민감도 확인 결과 24
그림 4. Strip assay를 이용한 융합세포주의 특이도 확인 결과 24
그림 5. 면역점 측정법을 이용한 융합세포주의 민감도 확인 결과 25
그림 6. 면역점 측정법을 이용한 융합세포주의 민감도 확인 결과 26
그림 7. 선정된 4종의 단클론항체의 해리상수 (Kd, dissociation constant) 28
그림 8. IFA (Indirect fluorescence assay)를 이용한 간흡충 충란 단클론항체와 간흡충 충란과의 반응성 확인 29
그림 9. 금 입자에 충란항원 특이적인 항체의 축합 방법 31
그림 10. 간흡충 충란 특이항체-금입자 결합체와 간흡충 충란과의 반응성 확인 31
그림 11. 라텍스 입자에 충란항원 특이적인 항체의 축합 방법 32
그림 12. Competitive latex agglutination 방법을 이용한 간흡충 충란 특이항체의 간흡충 충란 검출 실험 33
그림 13. Competitive latex agglutination 방법을 이용한 간흡충 충란 특이항체 16F12의 간흡충 충란 검출 실험 34
그림 14. 간흡충 충란 특이항체, 항체-라텍스 입자 축합체, 간흡충 충란간의 응집반응의 최적화 실험 34
그림 15. 간흡충 충란 추출 완충액의 최적화 실험 35
그림 16. 간흡충 충란 진단키트의 실험 방법 35
그림 17. 간흡충 충란 진단키트의 민감도 36
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