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표제지
목차
Abstract 7
요약문 8
Ⅰ. 서론 9
1. 연구의 배경 9
2. 연구의 목적 12
3. 연구의 필요성 13
Ⅱ. 연구내용 및 방법 15
1. 연구의 내용 15
가. 노로바이러스 감염특성 연구 15
나. 환경 중 노로바이러스의 변종 등 유전학적 특성 연구 16
다. 노로바이러스 유전자 DB 정리 및 분석 17
2. 연구수행 방법 18
가. 노로바이러스 감염특성 연구 18
나. 환경 중 노로바이러스의 변종 등 유전학적 특성 연구 20
다. 노로바이러스 유전자 DB 정리 및 분석 23
Ⅲ. 연구결과 및 고찰 26
1. 노로바이러스 감염특성 연구 26
가. 세포배양 이외의 노로바이러스 감염특성 자료 조사 26
나. 베큘로바이러스 (Baculovirus) 발현 유도체계 조사 36
2. 환경 중 노로바이러스의 변종 등 유전학적 특성 연구 46
가. 지하수, 하천수, 방류수 등 환경 중 노로바이러스 확보 46
나. 확보된 환경 분리주의 종류 분석 및 변종검출방법 개선 46
3. 노로바이러스 유전자 DB 정리 및 분석 56
가. NCBI에서 업데이트 되고 있는 정보를 시기 및 지역별로 정리 56
나. 노로바이러스 유전자형 결정을 통한 국내 분포특성 조사 (년도별) 56
다. 노로바이러스 유전자 DB와 식중독 사고 환자의 연관성 평가 57
라. MEGA 5.2 프로그램을 이용한 염기서열의 배열 및 계통분석 60
마. Nucleotide 및 Amino acid 분석을 통한 기능적 연관성 분석 66
Ⅳ. 결론 68
1. 노로바이러스 감염특성 연구 68
가. 세포배양 이외의 노로바이러스 감염특성 연구자료 조사 68
나. 베큘로바이러스(Baculovirus) 발현 유도체계 조사 68
2. 환경 중 노로바이러스의 변종 등 유전학적 특성 연구 70
가. 지하수, 하천수, 방류수 등 환경 중 노로바이러스 확보 70
나. 확보된 환경 분리주의 종류 분석 및 변종검출방법 개선 70
3. 노로바이러스 유전자 DB 정리 및 분석 71
가. NCBI에서 업데이트 되고 있는 정보를 시기 및 지역별로 정리 71
나. 노로바이러스 유전자형 결정을 통한 국내 분포특성 조사 (년도별) 71
다. 노로바이러스 유전자 DB와 식중독 사고 환자의 연관성 평가 72
라. MEGA 5.2 프로그램을 이용한 염기서열의 배열 및 계통분석 72
마. Nucleotide 및 Amino acid 분석을 통한 기능적 연관성 분석 73
참고문헌 74
〈Table 1〉 Primer Sequences and PCR products size 22
〈Table 2〉 Comparison of the diagnostic methods for RT-PCR and Realtime RT-PCR 27
〈Table 3〉 Sensitivity of RIDA® QUICK Norovirus, ImmunoCardSTAT®! Norovirus, NOROTOP® and SD BIOLINE Norovirus tests for different Norovirus genotypes in thawed stool samples 32
〈Table 4〉 Performance characteristics of 3 Norovirus antigen detection kits compared to 50 positive and 110 negative samples tested by Norovirus rRT-PCR 32
〈Table 5〉 Comparison of the results of ELISA, rapid antigen test, and real-time RT-PCR assays for the detection of Norovirus in stools 34
〈Table 6〉 Specimens showing discrepant results amomg the ELISA, rapid test, and real-time RT-PCR assays for the detection of Norovirus in stools 35
〈Table 7〉 Previous GⅡ primer and new GⅡ primer sets in this study 47
〈Table 8〉 Clinical samples in this study 48
〈Table 9〉 Contents of RT-PCR (One-step RT-PCR, Qiagen™) 49
〈Table 10〉 Conditions of RT-PCR (One-step RT-PCR, Qiagen™) 49
〈Table 11〉 RT-PCR results with 7 different primer pairs 51
〈Table 12〉 New nested inner primer (NKIⅡ-R2) for increase of sensitivity 51
〈Table 13〉 Contents of nested-PCR (Maxime PCR preMix kit(i-Startaq), Intron™ 51
〈Table 14〉 Conditions of nested-PCR (Maxime PCR preMix kit(i-Startaq), Intron™ 52
〈Table 15〉 List of environmental samples for used in this study 53
〈Table 16〉 Contents of RT-PCR (One-step RT-PCR, Qiagen™ 53
〈Table 17〉 Conditions of RT-PCR (One-step RT-PCR, Qiagen™) 54
〈Table 18〉 Contents of nested-PCR (Maxime PCR preMix kit(i-Startaq), Intron™ 54
〈Table 19〉 Conditions of nested-PCR (Maxime PCR preMix kit(i-Startaq), Intron™ 54
〈Table 20〉 Comparison of the detection efficiency for Norovirus positive samples by each primer pairs 55
〈Figure 1〉 Norovirus genome 9
〈Figure 2〉 Genetic structure of Norovirus 19
〈Figure 3〉 Lab confirmed Etiologies of Gastroenteritis Outbreaks, 2005-2009 26
〈Figure 4〉 Genomics regions targeted by RT-PCR assays used for Norovirus detection and genotyping 28
〈Figure 5〉 Schematic overview of the NoV particle 29
〈Figure 6〉 Location of critical residues within the MAb NV3901 and MAb NV3912 binding region 30
〈Figure 7〉 BEVS-EGFP expression system 37
〈Figure 8〉 Confirmation of the BEVS-EGFP expression system by EGFP 38
〈Figure 9〉 Sequences of Norovirus VP1 and VP2 regions 39
〈Figure 10〉 Schematic diagram for recombinant Baculovirus propagation containing Norovirus VP1 and VP2 genes 40
〈Figure 11〉 Schematic diagram for rVLP propagation using recombinant Baculovirus expression system and confirmation of VP1 and VP2 proteins expression by Western Blotting method 41
〈Figure 12〉 Hypervariable regions in protruding domain 2 (P2 domain) of VP1 and the VP1 interaction domain (VP1-ID) of VP2 in the global evolution of pandemic/epidemic Norovirus genogroup Ⅱ genotype... 43
〈Figure 13〉 Hypervariable regions in protruding domain 2 (P2 domain) of viral protein 1 (VP1) and the VP1 interaction domain (VP1-ID) of VP2 in the local emergence of the epidemic Norovirus genogroup Ⅱ genotype 4 (NoV GⅡ.4) 2006b strain 44
〈Figure 14〉 Physical protein-protein interaction between viral protein 1 (VP1) and VP2 among 3 human NoV GⅡ.4 strains 45
〈Figure 15〉 Summary for environmental water sampling information in 2013 46
〈Figure 16〉 Conserved region of Norovirus GII strain 47
〈Figure 17〉 RT-PCR results with 7 different primer pairs 50
〈Figure 18〉 Results of nested-PCR with NKⅡ-R2 primer 52
〈Figure 19〉 Result of RT-PCR with 3 different primer pairs 55
〈Figure 20〉 Norovirus sample collection in 2009~2012 56
〈Figure 21〉 Regional distribution of Norovirus in 2009~2012 57
〈Figure 22〉 Close relation with patient and environment samples of Norovirus GⅠ in 2009 57
〈Figure 23〉 Close relation with patient and environment samples of Norovirus GⅠ in 2010 58
〈Figure 24〉 Close relation with patient and environment samples of Norovirus GⅡ in 2010 59
〈Figure 25〉 Close relation with patient and environment samples of Norovirus GⅠ in 2011 59
〈Figure 26〉 Close relation with patient and environment samples of Norovirus GⅡ in 2011 59
〈Figure 27〉 Close relation with patient and environment samples of Norovirus GⅡ in 2012 60
〈Figure 28〉 Alignment of patient and environment samples of Norovirus GⅠ in 2009 61
〈Figure 29〉 Phylogenetic analysis of Norovirus GⅠ in 2009 61
〈Figure 30〉 Alignment of patient and environment samples of Norovirus GⅡ in 2009 61
〈Figure 31〉 Phylogenetic analysis of Norovirus GⅡ in 2009 62
〈Figure 32〉 Alignment of patient and environment samples of Norovirus GⅠ in 2010 62
〈Figure 33〉 Phylogenetic analysis of Norovirus GⅠ in 2010 62
〈Figure 34〉 Alignment of patient and environment samples of Norovirus GⅡ in 2010 63
〈Figure 35〉 Phylogenetic analysis of Norovirus GⅡ in 2010 63
〈Figure 36〉 Alignment of patient and environment samples of Norovirus GⅠ in 2011 64
〈Figure 37〉 Phylogenetic analysis of Norovirus GⅠ in 2011 64
〈Figure 38〉 Alignment of patient and environment samples of Norovirus GⅡ in 2011 65
〈Figure 39〉 Phylogenetic analysis of Norovirus GⅠ in 2011 65
〈Figure 40〉 Alignment of patient and environment samples of Norovirus GⅡ in 2011 66
〈Figure 41〉 Phylogenetic analysis of Norovirus GⅡ in 2012 66
〈Figure 42〉 Genetics sequences analysis of Norovirus GⅡ in 2010 67
〈Figure 43〉 Amino acid sequences analysis of Norovirus GⅡ in 2010 67
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