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보고서 요약서
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SUMMARY
Contents
목차
제1장 연구개발과제의 개요 12
제1절 연구개발의 목적 및 필요성 12
가. 연구 개발 대상 기술의 경제적·산업적 중요성 및 연구 개발의 필요성 12
제2장 국내외 기술 현황 15
가. Clinical MRM 기술에서의 국내외 기술 수준 15
(1) 국내 Proteomics 연구 환경의 변화 15
(2) Verification 과정에 필요한 임상 시료의 중요성 및 정량 기술의 개발 15
(3) 단일 마커의 단점을 보완하기 위한 다중 마커 개발 15
(4) 국내 바이오마커와 진단 분야 기술개발 16
(5) 다중 면역 분석 기술의 국내 개발 수준 16
(6) Multi-marker panel 을 이용한 multiplex assay 진단 기술 개발 17
나. Microwell plate 기잔 진단 assay 국내외 기술 수준 17
(1) 상업화 된 다중 분석 방법의 변화 양상(위치정렬에 의한 다중 분석 기술의 발전) 17
제3장 연구개발수행 내용 및 결과 18
제1절 생분자 시그너처 검증을 위한 Clinical MRM 및 Immunoassay 기술 개발 18
가. Malignant 위암 특이적 ascites 생분자 시그너처 검증 Clinical MRM 18
나. Malignant 위암 진단을 위한 Clinical MRM assay platform 개발 42
다. 위암 특이적 Blood 생분자 시그너처 검증 Clinical MRM 60
라. Ascites 에서의 Proteogenomic 마커 후보군의 validation 연구 64
마. Earlyonset 및 malignant Plasma에서의 Proteogenomic 마커 후보군의 validation 연구 68
제2절 생분자 시그너처 항체개발 및 Immunoassay방법 확립 72
가. 전이 위암 혹은 미분화 암 특이적 위암 생분자 시그너처 후보 발굴 72
나. 바이오마커 후보군의 선정과 간단한 verification 방법을 이용한 임상샘플에서 증명 73
다. Middle-scale 시료에서의 위암 전이, 예후 판정 생분자 시그너처 후보군의 검증 방법 확립과 검증작업 81
라. 위암 전이, 예후 판정 생분자 시그너처 특이 단클론 항체 개발을 위한 면역원성 protein 확보 87
마. 위암 예후 판정 생분자 시그너처의 특이 단클론 항체의 개발(3차년) 88
바. 선정된 위암 전이 예후 판정용 바이오마커 특이적인 항체 개발 92
제3절 생분자 시그너처의 Multiplex Assay 플랫폼기술 개발 97
가. 서로다른 3가지 다중 단백질 마커 검출을 위한 OLISA 조건 확립 97
나. 다중 검색도가 확장된 OLISA 개발 99
다. 5-plex 다중 OLISA의 활용 조건 확립 102
라. Microarray 기반 다중 면역 분석법에 활용 가능한 5쌍의 DNA barcode 서열의 고안 및 제조 105
마. Microarray상 금 나노입자에 고정 된 DNA를 microarray상에서 정량하기 위한 최적 신호 생성 조건 확보 108
바. 마커 검출을 위한 microarray-OLISA 테스트 109
사. Microarray 표면 조건 및 microarray상 분석 조건 최적화 109
아. 단일 모델 단백질 마커의 microarray-OLISA를 이용한 정량 분석 조건 확립 111
자. 5종 모델 단백질 마커의 개별 분석을 위한 single microarray-OLISA 111
차. 두 가지 모델 단백질 마커의 microarray-OLISA를 이용한 동시 정량 분석 조건 확립 112
카. 5종 모델 단백질의 동시 분석을 위한 5-plex microarray-OLISA 분석법 확립 113
제4장 목표달성도 및 관련분야에 기여도 114
제1절 연구개발 목표의 달성도 114
제2절 관련 분야의 기술발전에의 기여도 116
제5장 연구개발결과의 활용계획 117
제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 118
가. 세계적 수준의 Clinical MRM Assay 기술 확립 118
나. 표준화 질량분석 플랫폼 가이드라인 제시(CPTAC assay portal) 118
다. 항체 개발 및 Immunoassay 방법 확립 118
라. 면역 분석 기술 변화 118
마. High-throughput sequencing기기를 이용한 다중 면역 분석 방법 구축 시도 119
제7장 연구시설·장비 현황 120
제8장 참고문헌 121
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