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SUMMARY
목차
제1장 연구개발과제의 개요 7
제2장 국내외 기술 개발 현황 8
(1) 세계적 수준 8
(2) 국내수준 9
제3장 연구 수행 내용 및 성과 11
1. 혈장 프로테옴 시료준비 SOP 확립 11
1) 혈액 내 주요 고농도 단백질이 제거 SOP 확립 11
2) 역상크로마토그래피 기반의 단백체 분획방법 확립 12
3) 당쇄화 프로테옴 프로파일링 방법 확립 13
2. 혈장 프로테옴 분석 플렛폼 확립 13
1) 선도개발 기기 플렛폼을 이용한 글로벌 프로테옴 분석방법 확립 13
2) 혈장 글로벌 프로테옴 프로파일링 및 당쇄화 프로테옴 프로파일링 14
3) 초간단 이중 온라인 액체 크로마토그래피기술 개발 16
3. 광범위한 혈장 프로테옴 프로파일링 수행 18
1) 50례의 혈액시료 내 주요 고농도 단백질이 제거된 글로벌 펩티드 시료 확보 18
2) 혈장 펩티드 시료에 대한 TMT 표지 수행 19
2) BRP 분획법을 통한 표지 펩티드 분획 수행 19
3) 24개 각 분획시료에 대한 고감도 프로테옴 프로파일링 실시 19
4) 당쇄화 프로테옴 정량 프로파일링 수행 20
4. 고감도 Tageted MS/MS 실험 수행 23
1) 고감도, 고재현성의 표적지향 단백질 분석 기법 (BRP-F-PRM) 확립 23
2) 확립한 Targeted MS/MS 방법의 검증 26
3) 온라인 비연속적 시료 분획/ 통합법 개발 26
5. CN- 대비 CN+, MCI+, AD+의 DEP 선정 28
가. 펩타이드 및 단백질 동정 28
나. 동정된 펩타이드의 반복성 파악 28
다. 동정된 글로벌 및 당쇄화 펩티드의 패턴 분석 29
라. 글로벌 및 당쇄화 펩티드의 주요 패턴분류 29
마. CN- 대비 CN+, MCI+, AD+에서 발현 변화가 유의한 펩타이드 동정 30
바. CN- 대비 CN+, MCI+, AD+에서 발현 변화가 유의한 단백질 동정 31
사. 발현 변화가 유의한 단백질의 생물학적 특성 및 네트워크 분석 31
6. MCI- 대비 MCI+ 의 DEP 선정 32
가. 펩티드 및 단백질 동정 32
나. 동정된 펩티드의 반복성 파악 32
다. MCI- 대비 MCI+에서 발현 변화가 유의한 펩티드 동정 33
라. MCI- 대비 MCI+에서 발현 변화가 유의한 단백질 동정 33
마. 발현 변화가 유의한 단백질의 생물학적 특성 분석 34
7. 기발표된 알츠하이머 조직 유전체 또는 혈액 프로테옴 데이터 수집 및 분석을 통한 인프라 데이터 구축 34
가. 기발표된 AD 혈액 프로테옴 리스트 확보 34
나. 기발표된AD 뇌조직 유전체 데이터 확보 35
다. 혈액 분비 단백질 리스트 확보 (Secretome) 35
라. 텍스트 마이닝을 통한 유전자별 AD논문 편수 확보 36
8. 수집한 인프라 데이터를 바탕으로 마커 후보군 선정 36
가. CN- 대비 CN+, MCI+, AD+의 마커 후보군 선정 36
나. MCI- 대비 MCI+의 마커 후보군 선정 37
9. 영상 자료와 통합을 위한 상관관계 분석 38
10. 조기진단 혈액 바이오마커 후보물질의 생화학적 효율 검증 조건 확립 40
1) 알츠하이머성 치매의 대표적 진단 후보물질중 하나인 아밀로이드 베타의 혈중 정량방법 확립 40
2) 단백분해 억제제 처리에 의한 혈중 아밀로이드 베타 농도와 뇌 아밀로이드 PET 영상과의 상관성 규명 42
3) 글로벌 프로테오믹스 선행결과에 따른 진단 후보물질인 protein A의 혈중 정량 : ELISA technology 실험기법 이용 42
4) Serum 혈액을 사용한 iTRAQ 프로테오믹스 결과로 나온 알츠하이머성 치매 바이오마커 후보물질들의 분석 43
5) Western blot analysis 방법을 이용한 개별 바이오마커 후보 (Protein B, C)들의 생화학적 검증 실시 43
11. 생화학적 검증을 통한 바이오마커 후보물질들의 2차 선별 44
1) 프로테오믹스 분석에서 선별된 바이오마커 후보물질들의 생화학적 검증을 통해 2차선별 44
2) 혈액 인자 46
3) 경도인지장애환자에서 뇌 아밀로이드 베타의 축적을 선별하는 알츠하이머성 MCI 특이적 바이오마커의 발굴 (MCI- vs MCI+) 47
4) 질병 단계별 바이오마커 선별 47
12. 진단키트 개발 49
1) 진단키트 개발을 위한 원천 기술 및 기업 참여 49
2) 식약처 승인을 위한 차세대의료기기 프로그램 선정 50
3) 진단키트 제작의 구체화 51
4) 분석 리더기 및 프로그램의 동시 개발 착수 52
13. 조기진단 혈중 바이오마커 후보물질로서 마이크로 RNA분석 53
14. 알츠하이머 질환 동물 뇌조직 분석 결과에 기반한 1차 치매특이적 인산화 펩타이드 바이오마커 후보군의 선정 55
15. 알츠하이머 환자 혈액 시료 인산화 단백질체 분석 시스템 확립 56
16. 알츠하이머성 치매 환자 혈액을 대상으로 한 동물 모델 기반 인산화 펩타이드 바이오마커의 검증 57
17. 알츠하이머성 치매 환자 혈액 인산화 단백질체 비교 정량 분석을 통한 조기 진단용 인산화 펩타이드 후보군 소규모 발굴 58
18. 알츠하이머성 치매 환자 혈액 인산화 단백질체 비교 정량 분석을 통한 조기 진단용 인산화 펩타이드/Sialidated 당쇄화 펩타이드 후보군 발굴 64
제4장 목표 달성도 및 관련 분야 기여도 69
1. 목표 달성도 69
2. 관련 분야 기여도 70
(1) 연구개발의 최종목표 70
(2) 연차별 연구개발 목표 및 내용 70
(3) 계획대비 달성도 (선정 시 제시된 연구목표) 74
(4) 위 연구목표(총연구기간)에서 중요도 순으로 4~5개 목표 추출 및 가중치 부여(세부연구목표는 5개를 넘을 수 없으며, 총괄과제의 경우 세부과제의 내용을 포함하여 작성) 75
제5장 연구개발성과의 활용계획 77
제6장 연구 과정에서 수집한 해외 과학기술 정보 78
제7장 연구개발성과의 보안등급 78
제8장 국가과학기술종합정보시스템에 등록한 연구시설·장비 현황 78
제9장 연구개발과제 수행에 따른 연구실 등의 안전 조치 이행 실적 79
가. 연구실 안전 점검 체계 및 실시 79
(1) 실험실 안전 점검 체계 79
(2) 실험실 정밀안전진단 실시 79
나. 교육 훈련 79
다. 보험 가입 현황 80
라. 추가 이행 계획 80
제10장 연구개발과제의 대표적 연구 실적 81
제11장 기타 사항 82
제12장 참고문헌 82
[뒷표지] 83
원문구축 및 2018년 이후 자료는 524호에서 직접 열람하십시요.
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