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보고서 요약서
SUMMARY
Contents
목차
제1장 연구개발과제의 개요 8
1. 연구개발 목적 8
2. 연구개발의 필요성 8
가. 연구개발대상 기술의 경제적·산업적 중요성 및 연구개발의 필요성 8
나. iPS세포의 실용화를 위한 문제점 대두 및 이의 해결 과정 9
다. iPS세포의 실용화를 위한 해결되지 않은 대표적 과제 9
라. 리프로그램밍 효율이 낮은 원인 10
마. iPS세포의 염색체 수 이상의 원인 10
바. iPS세포에서 cell cylce-apoptosis uncoupling 연구의 필요성 11
사. 리프로그램밍 과정에서 apoptosis 연구의 필요성 11
3. 연구개발 범위 11
제2장 국내외 기술개발 현황 12
제3장 연구개발수행 내용 및 결과 13
1. 배아줄기세포 염색체 불안정성 분자적 기전 규명 및 염색체 불안정성 방지법 개발 - checkpoint -apoptosis coupling 단백 발굴 13
가. p38의 활성 저하에 의한 aneuploid cells의 전단계인 tetraploid cells의 형성 13
나. SIRT1 유전자 결실에 의한 tetraploid cells의 형성 저해 16
다. SIRT1 활성억제에 의한 배아줄기세포의 발암성 억제 19
2. 단일 클론 리프로그래밍 세포주 개발 20
가. 리프로그래밍 세포주 개발을 위한 MEF-Oct4-GFP의 immortalization 20
나. 역분화인자 함유 생쥐 MEF-Oct4-GFP 리프로그래밍 세포주 개발 22
다. 리프로그래밍 세포주의 단일세포 유래 증명 25
라. 리프로그래밍 세포주 GC5로부터 유래된 iPSC의 특성 분석 26
마. 리프로그래밍 세포주를 이용한 리프로그래밍 극대화 조건 도출 29
3. 단일 클론 리프로그래밍 세포주를 이용한 리프로그램밍 신호체계 규명 31
가. 신호전달 protein array를 통한 리프로그래밍 신호전달 기작연구 31
나. Erk 활성 조절에 의한 리프로그래밍 효율 증대 33
다. 리프로그래밍에 관여하는 ERK의 하부신호전달 탐색 36
라. SRF 활성 관여 단백질들의 발현 감소에 의한 리프로그래밍 효율 탐색 38
마. RNA seq을 이용한 리프로그래밍 초기에서 IEG 발현 조사 39
바. IEG에 의한 정상세포에서 리프로그래밍 효율 조사 42
사. SRF 활성이 리프로그래밍과 stemness에 미치는 영향 44
4. 세포사멸 억제 유전자 발굴 및 리프로그래밍 기능 검증 45
가. CellEvent Caspase 3/7-GFP 이용 형광현미경 기반 세포 사멸 측정 45
나. 세포사멸 억제 유전자 발굴 및 리프로그래밍 기능 검증 48
5. 인간 체세포용 리프로그래밍 리포터 벡터 개발 50
가. 리프로그래밍 리포터 벡터 개발 50
나. 리프로그래밍 리포터 영구 발현 사람평활근세포주 구축 51
6. 단일 클롤 리프로그램 세포주를 이용한 세포내 DNA 손상 신호 모니터링 및 DNA 손상 신호 조절을 통한 리프로그래밍 효율 증대 52
7. checkpoint-upcoupling 조절단백질 SIRT1에 의한 리프로그램밍 효율 증대 규명 54
가. 리프로그램 과정 중의 SIRT1의 발현변화 54
나. SIRT1 activator인 SRT1720 처리에 의한 인간 체세포의 리프그램밍 효율 증대 55
8. 인간배아줄기세포로부터 골 및 연골로 분화할 수 있는 전구세포로의 분화법 개발 57
가. 인간배아줄기(hESC)로부터 중간엽줄기세포(MSC) 유사 세포(MSC-like cells/MSCLC)로의 분화 57
나. 인간배아줄기세포로부터 분화한 중간엽 줄기세포 유사세포(MSCLCs)의 특징 58
다. MSCLC의 분화능 - 뼈로 주로 분화되는 중간엽 줄기세포에 비해 뼈 전문 분화능을 지님(골, 연골, 근육으로 분화되고 지방세포로는 분화되지 않음) 61
9. 인장 자극을 이용한 유도만능줄기세포 효율 증진법 개발 65
제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 71
1. 목표 달성도 71
2. 관련 분야 기여도 73
제5장 연구개발결과의 활용계획 75
제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 77
제7장 연구개발성과의 보안등급 80
제8장 국가과학기술종합정보시스템에 등록한 연구시설·장비 현황 81
제9장 연구개발과제 수행에 따른 연구실 등의 안전 조치 이행 실적 82
제10장 연구개발과제의 대표적 연구 실적 83
제11장 기타 사항 84
제12장 참고문헌 85
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