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목차
1. 연구개발과제의 개요 6
2. 연구수행내용 및 성과 6
가. 최상위 혈액줄기세포(LT-HSC)에서 CD82 (KAI1) 발현 조절 연구 6
나. 인간 제대혈 최상위 조혈모세포의 KAI1에 의한 휴면(quiescence) 유지 분석 11
(1) [인간 제대혈] 최상위 조혈모세포의 KAI1 발현 검증 11
(2) [인간 제대혈] KAI1발현 세포의 휴면 상태 분석 11
다. 인간 최상위 조혈모세포의 KAI1 활성화 방법 연구 13
(1) rhDARC에 의한 인간 최상위 조혈모세포 KAI1의 활성화 검증 13
(2) rhDARC에 의한 인간 최상위 조혈모세포 휴면 증가 확인 14
라. 인간 최상위 조혈모세포의 KAI1 발현 조절 방법 연구 14
(1) 인간 최상위 조혈모세포의 KAI1 발현 조절 연구 14
마. rhKAI1에 의한 대식세포의 기능 변화 및 DARC 하위 기전 분석 16
(1) DARC를 발현하는 대식세포에 rhKAI1을 처리한 뒤, RNA-sequencing을 통해 변화하는 유전자를 스크리닝 함 16
(2) rhKAI1에 의한 DARC 신호전달 검증 17
바. 조혈모세포 분열 (division) 및 분화 (differentiation) 에서의 KAI1 역할 분석 18
1. KAI1-emGFP mouse을 활용한 최상위 조혈모 세포 분리 후 division 시에 KAI1 distribution을 실시간 이미지를 통해 분석 18
2. 조혈모(전구)세포에서 KAI1/DARC 의한 분화 및 분열 능력 검증 19
바. 최상위 조혈모 세포의 KAI1 자극을 위한 단백질 및 세포를 이용한 저장 및 이식 방법 최적화 21
1. rhDARC을 활용한 세포 초저온 저장 (Cell Freezing)에 의한 생존능력 및 조혈작용 능력 평가 21
2. rhDARC에 의한, 이식편대숙주병 및 조혈모세포의 생착능력 평가 22
바. KAI1(CD82)에 의한 혈관신생 조절기전 연구 22
(1) 정상 마우스와 KAI1 넉아웃 (knockout) 마우스의 꼬리 상처 치유 (tail wound healing) 속도 비교 22
(2) 위의 실험에서 상처 치유 중인 마우스 조직을 혈관특이적인 표지자 (marker, 가령 내피세포의 경우 CD31, 주피세포의 경우 NG2, desmin, αSMA)로 면역형광염색(immunofluorescence)하여 혈관 밀도 차이 확인 23
(3) Kai1-emGFP 마우스를 활용한 혈관 구성 세포들의 KAI1 발현 검증 23
(4) KAI1을 발현하는 주피세포의 상등액으로 혈관내피세포를 배양하고, 내피세포-주피세포 공배양 (co-culture)을 통해 체외 (in vitro)에서의 내피세포의 혈관 형성능 비교(튜브 형성능 (tube formation) 비교, 이동 (migration) 능력 비교) 24
(4) 정상과 KAI1 손실 주피세포의 배양 상등액으로 혈관내피세포를 배양했을 때 혈관 형성능 변화 비교 24
(5) 혈관 내 KAI1 발현 세포가 항-혈관신생 역할을 하는 기전 분석 (KAI1의 하위 신호전달기전 분석) 25
3. 목표 달성도 및 관련 분야 기여도 26
가. 목표 26
다. 목표 미달성 시 원인(사유) 및 차후대책(후속연구의 필요성 등) 26
4. 연구개발성과의 활용 계획 등 26
가. 실용화를 위한 구체적인 전략과 계획 26
나. 기대효과 26
(1) 기술적 측면 26
(2) 경제적·산업적 측면 26
〈별첨〉 주관연구기관의 자체평가 의견서(내용없음) 5
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