두경부에서 가장 높은 빈도로 발생하는 편평세포암 여덟 세포주를 수립하고 각 세포주로부터 genomic DNA를 분리하여 PCR 클로닝을 시행한 후 p16INK4A의 유전자 이상 여부와 결손 및 변이 양상을 분석하고 p16INK4A의 단백 발현의 이상과 cyclin D1 단백의 과발현 및 Rb 단백의 인산화 상태를 관찰하였다.
DNA 중합효소연쇄반응과 염기서열결정을 통하여 전체 여덟 주 가운데 p16INK4A의 exon 1은 동형접합성결손을 두 주에서 점돌연변이 및 결손을 각각 한 주에서 관찰할 수 있었다. Exon 2는 한주에서 동형접합성결손을, 네주에서 점돌연변이를 관찰하였다.
각 세포주기 조절인자의 mRNA 발현여부를 조사하기 위해 ribonuclease protectin assay를 시행한 결과, p16INK4A은 여덟 세포주 가운데 세 주에서, Rb는 여덟 주 모두에서 발현되었다.
p16INK4A의 단백 발현 여부를 조사하기 위해 Western blotting을 시행하였는데, mRNA가 3주에서 발현되었음에도 불구하고 여덟 주 모두에서 단백 발현이 관찰되지 않았는데 이것은 염기서열결정시 확인한 바와 같이 점돌연변이에 의해 50번째 코돈에서 종결코돈의 형성으로 해독과정이 중단되었기 때문으로 생각된다.
Western blotting을 이용하여 Rb 단백의 인산화 상태를 관찰하였는데 네 주에서 hypeiphosphorylated Rb와 hypophosphorylated Rb가 함께 관찰되었고 cyclin D1은 여덟 주 모두에서 과발현을 보였다. p16INK4A의 결손과 Rb의 hyperphosphorylation 및 cyclin D1의 과발현,은 각각이 독립적으로 암발생에 영향을 미칠 뿐만 아니라 상호 억제 혹은 촉진자로서 작용하여 보다 복잡 다양한 기전을 통해 세포주기를 가속화 시킴으로써 두경부 편평세포암의 암발생기전에 중요한 역할을 할 것으로 사료된다