표제지
목차
Abbreviations 9
Ⅰ. 서론 10
Ⅱ. 재료 및 방법 15
1. 암세포의 배양 15
2. 길경 수용액의 추출 및 처리 15
3. 길경 추출물 처리에 따른 암세포형태 변화 관찰 16
4. MTT assay를 이용한 세포 성장의 측정 16
5. Hematocytometer를 이용한 세포 생존률의 측정 17
6. DNA flow cytometry에 의한 세포주기 분석 17
7. DAPI staining을 통한 암세포 핵의 형태 관찰 18
8. RT-PCR을 이용한 mRNA 발현의 분석 18
9. SDS-polyacrylamide gel전기영동 20
10. Western blot analysis 25
11. cDNA microarray분석 27
1) RNA의 준비 27
2) Fluorescence probe의 합성 27
3) Microarray hybridization 28
4) Scanning및 결과 분석 28
Ⅲ. 결과 및 고찰 31
1. NCI-H460 인체 폐암세포의 형태 변화에 미치는 길경 추출물의 영향 31
2. NCI-H460 인체 폐암세포의 증식에 미치는 길경 추출물의 영향 33
3. NCI-H460 인체 폐암세포의 생존에 미치는 길경 추출물의 영향 35
4. NCI-H460 인체 폐암세포의 세포주기 분포에 미치는 길경 추출물의 영향 37
5. NCI-H460 폐암세포의 apoptosis유발에 미치는 길경 추출물의 영향 40
6. NCI-H460 폐암세포에서 cyclins의 발현에 미치는 길경 추출물의 영향 44
7. NCI-H460 폐암세포에서 Cdks의 발현에 미치는 길경 추출물의 영향 46
8. NCI-H460 폐암세포의 p53및 pRB의 발현에 미치는 길경 추출물의 영향 48
9. NCI-H460 폐암세포의 Cdkinhibitors의 발현에 미치는 길경 추출물 의 영향 50
10. cDNA microarray를 위한 RNA의 QC 확인 52
11. cDNA microarray분석 결과 53
Ⅳ. 결론 62
참고문헌 64
Abstract 74
Table 1. Reaction components for RT 21
Table 2. Reaction components for PCR 22
Table 3. Condition for PCR 22
Table 4. Components of ONE-STEP RT-PCR PreMix 23
Table 5. Reaction components for RT-PCR 23
Table 6. Gene-specific Primers for RT-PCR 24
Table 7. Antibodies used in the present study 26
Table 8. Fractions of each cell cycle phase of NCI-H460 human lung carcinoma cells cultured in the presence or absence of various concentration of AEPG for 48 h 39
Table 9. List of up-regulated genes in NCI-H460 human lung carcinoma cells after AEPG treatment 58
Table 10. List of down-regulated genes in NCI-H460 human lung carcinoma cells after AEPG treatment 61
Fig.1. A process of cDNA microarray chip assay 30
Fig.2. Morphological changes in NCI-H460 human lung carcinoma cells following incubation with an aqueous extract of Platycodon grandiflorum (AEPG) 32
Fig.3. Anti-proliferative effects of NCI-H460 human lung carcinoma cells following incubation with AEPG 34
Fig.4. Inhibition of cell viability by treatment with an aqueous extract of AEPG in human lung cancer NCI-H460 cells 36
Fig.5. DNA-flourescence histogram of NCI-H460 cell nuclei after treatment with AEPG 38
Fig.6. Induction of cell death by AEPG treatment in NCI-H 460 human lung carcinoma cells 41
Fig.7. Induction of apoptotic bodies in AEPG-treated NCI-H 460 human lung carcinoma cells 42
Fig.8. Effect of AEPG treatment on the levels of cyclins in NCI-H460 human lung carcinoma cells 45
Fig.9. Effect of AEPG treatment on the levels of Cdks in NCI-H460 human lung carcinoma cells 47
Fig.10. Effect of AEPG treatment on the levels of p53 and pRB in NCI-H460 human lung carcinoma cells 49
Fig.11. Effect of AEPG treatment on the mRNA and protein levels of Cdk inhibitors,p16,p21 and p27,in NCI-H460 human lung carcinoma cells 51
Fig.12. Results of RNA quality check(QC) for cDNA microarray assay 54
Fig.13. Color image of microarray used to analyze transcript level in cultured NCI-H460 human lung carcinoma cells after AEPG treatment with 2.0mg/ml 55