표제지
목차
I. 서론 8
II. 연구사 10
1. 조류의 인공 체외 배양 기술 10
2. 형질전환 닭 생산 11
1) 1-세포기 수정란을 이용한 형질전환 닭 생산 11
2) 원시생식세포(Primordial germ cell)를 이용한 형질전환 닭 생산 12
3) Virus vector를 이용한 형질전환 닭 생산 13
4) 정자(sperm)를 이용한 형질전환 동물 생산 14
III. 재료 및 방법 15
1. 공시동물 15
2. 1-세포기 닭 수정란의 채란 15
3. 1-세포기 수정란의 체외배양 16
4. 배반엽단계(stage-X)수정란의 체외배양 18
5. Retrovirus 생산 18
6. 유전자 미세주입 19
1) 배반엽단계 수정란에 liposome 혼합물 도입 19
2) 1-세포기 수정란에 liposome 혼합물 도입 20
3) 배반엽단계 수정란에 retrovirus 도입 20
4) 1-세포기 수정란에 retrovirus 도입 21
7. 통계분석 21
IV. 결과 및 고찰 22
1. 리포좀을 이용한 닭의 형질전환 방법 22
1) 배반엽단계 수정란에 liposome을 이용한 외래 유전자 도입 22
2) 1-세포기 수정란에 liposome을 이용한 외래 유전자 도입 27
2. Retrovirus를 이용한 닭의 형질전환 방법 31
1) Retrovirus의 생산과 titration 31
2) 배반엽단계 수정란에 retrovirus 도입 33
3) 1-세포기 수정란에 retrovirus 도입 35
V. 결론 38
VI. 참고문헌 40
ABSTRACT 46
Table 1. Effect of liposome on the foreign gene expression at day 3 chicken embryos 23
Table 2. Effect of liposome concentration on the foreign gene transfection 25
Table 3. Effect of DNA concentration on the foreign gene transfection 26
Table 4. Comparison of transfection efficiency of the Lipofectin and the Lipofectamine2000 in blastodermal stage embryo 27
Table 5. Effect of liposome on the foreign gene expression at day 4 chicken embryos 28
Table 6. Effect of polybrene concentration on transduction of stage-X embryo 34
Table 7. Comparison of survivalratio of the naked DNA or retrovirus injection on the one-cell stage embryo 36
Figure.1. DNA microinjection and culturepro cedure in chicken embryos. 17
Figure 2. GFP expression pattern in day-3 embryo. 2000 nlof mixtures of liposome(100 ㎍/㎖) and DNA(25 ㎍/㎖) were micro injected into the germinal disc of blastodermal stage embryo. The embryos were sacrificed at 3 24
Figure 3. GFP expression pattern in day-4 embryo.20 nl of mixtures of liposome(100 ㎍/㎖) and DNA(25 ㎍/㎖) were microinjected into the germinaldisc of one cellembryo. The embryos were sacrificed at 4 day 30
Figure 4. Photograph of crystal violet stained NIH/3T3 cells transduced with the serial diluted retroviruses expressing the neomycin resistance gene. Following virus infection, cells were cultured with complete media for 24 32
Figure 5. GFP expressionpatternonchickenembryos. A: 1000 nl of mixtures of viurs and polybrene (10㎍/㎖) were microinjected into the germinal disc of blastodermal stage embryo. The embryos were sacrificed at 3 day 37