표제지
목차
I. Introduction 6
1. Chitinase 6
2. 연구 목적 8
3. Laccase 10
II. Methods 19
1. P. pastoris 에 chitinase 1 형질 전환 19
1-1. P. pastoris준비 19
1-2. P. pastoris competent cell 준비 19
1-3. Plasmid DNA 준비 19
1-4. 형질 전환 19
2. 형질 전환체 확인 21
2-1. 항생물질 저항성 확인 21
2-2. PCR 확인 21
2-3. Methanol을 이용한 induction 21
2-4. Chitinase 활성 측정 22
2-5. 확대배양 및 SDS-PAGE 22
3. Chitinase 1 생화학적 특성 22
3-1. Chitinase 1 최적 pH 22
3-2. Chitinase 1 최적 온도 23
3-3. Chitinase 1 Vmax, Km 값(이미지참조) 23
4. 병원성 미생물의 생장 억제 관찰 23
4-1. 병원성 미생물 배양 23
4-2. SEM 관찰을 위한 준비 23
5. 피부진균류의 균사 생장 억제 관찰 24
5-1. 피부진균류 배양 24
5-2. 생장 억제 관찰을 위한 균체 준비 24
6. Fusarium graminearum의 균사 생장 억제 관찰 24
6-1. F. graminearum 배양 24
6-2. 생장 억제 관찰을 위한 균체 준비 25
7. A. alternata의 균사 생장 억제 관찰 25
7-1. A. alternata 배양 25
7-2. 생장 억제 관찰을 위한 균체 준비(내용없음) 4
8. C. congregatus Lac2 promote r형질전환 25
8-1. C. congregatus 배양 25
8-2. 형질 전환 25
8-3. 형질 전환체 확인 27
8-4. confocal 확인을 위한 시료 준비 27
8-5. qRT-PCR 확인을 위한 시료 준비 27
III. Results 29
1. P. pastoris에 chitinase 1 형질전환 29
1-1. Plasmid DNA 구축 29
2. 형질 전환체의 확인 29
2-1. 형질 전환체의 확인 29
2-2. 형질 전환체의 chitinase 활성 측정 29
2-3. SDS-PAGE 32
3. Chitinase 1 생화학적 특성 32
3-1. Chitinase 1 최적 pH, 온도 32
3-2. Chitinase 1 Vmax, Km 값(이미지참조) 36
4. 병원성 미생물의 생장 억제 기능 관찰 36
4-1. SEM을 이용한 세포 모양 변화 관찰 36
5. 피부진균류의 균사 생장 억제 기능 관찰 41
5-1. cap tube를 이용한 생장 억제 관찰 41
6. F. graminearum의 생장 억제 기능 관찰 41
6-1. cap tube를 이용한 생장 억제 관찰 41
7. A. alternata의 생장 억제 기능 관찰 41
7-1. cap tube를 이용한 생장 억제 관찰 41
8. C. congregatus에 Lac2 promoter 형질 전환 45
8-1. 형질 전환체의 확인 45
8-2. confocal scanning을 통한 GFP 발현 확인 45
8-3. qRT-PCR 관찰을 통한 발현량 확인 45
IV. Discussion 53
V. References 54
VI. Abstract 64