구강암의 대부분을 이루고 있는 구강 편평상피세포암종은 주로 림프관을 통해 원발암에서 배출되는 첫 번째 림프절인 파수꾼 림프절로 전이되기 때문에 구강암 환자의 예후를 예측하고 치료를 결정하는데 파수꾼 림프절 전이 유무는 매우 중요하다고 알려져 있다. 본 학위논문에서는 구강암에서 파수꾼 림프절 전이 기전을 확인하고 이를 타깃으로 한 새로운 치료제를 천연물질들고부터 찾고자 하였다. 우선적으로 구강암 파수꾼 림프절 동물 모델을 확립하였으며 확립한 동물모델에서 종양형성 및 파수꾼 림프절의 거대화를 확인하였다. 또한 확립한 동물로부터 채취한 혀와 파수꾼 림프절 조직을 hematoxylin and eosin 염색법을 이용하여 확인한 결과 원발암의 종양세포가 파수꾼 림프절로 전이가 먼저 일어나는 것을 확인하였다. 구강암 파수꾼 림프절 전이의 필수 과정인 림프관신생에 주되게 작용하는 lymphangiogenic factor를 확인하기 CoCl₂를 처리하여 in vivo와 유사한 hypoxia가 유도된 SCCVII 세포에서 VEGF family, angiopoetin family, PDGF, FGF, IGF 그리고 HGF 등 lymphangiogenic factor들의 발현 변화를 조사한 결과 다른 인자들에 비해 VEGF-A의 발현 변화가 가장 크게 나타났다. 구강암에서 VEGF-A가 림프절 전이와 림프관신생에 미치는 영향을 확인하기 위해 VEGF-A가 과발현되거나 발현이 억제된 SCCVII 세포주를 확립하고, 그 세포의 배양배지를 이용하여 인간림프관내피세포 (HLMEC)의 증식, 이동 그리고 림프관 형성을 확인하였다. 그 결과 VEGF-A가 과발현된 SCCVII 세포의 배지를 처리한 경우 HLMEC의 증식, 이동 그리고 림프관 형성이 촉진되었으며, VEGF-A 발현이 억제된 SCCVII 세포의 배지를 처리한 경우에서 HLMEC의 증식, 이동 그리고 림프관 형성이 정상 SCCVII 세포의 배지를 처리한 군에 비해 억제되었다. 또한, VEGF-A의 발현이 조절된 SCCVII 세포를 이용하여 확립한 동물모델에서 VEGF-A의 과발현에 의해 종양의 성장 및 파수꾼 림프절의 거대화가 촉진되었으며 반대로 VEGF-A의 발현 억제에 의해 종양의 성장 및 파수꾼 림프절의 거대화가 억제되었다. 뿐만 아니라 VEGF-A의 과발현에 의해 파수꾼림프절의 전이 및 파수꾼 림프절에서 림프관신생이 촉진되고 반대로 VEGF-A의 발현에 의해 억제 되는 것을 확인하였다. VEGF-A가 HLMEC에서 VEGFR-1 및 VEGFR-2를 활성화시키고 림프관신생 관련 하위 신호전달 인자로 작용하는 FAK, PI3K, AKT, p38 및 ERK를 활성화시킴으로써 림프관신생을 유도한다는 것을 확인하였다. VEGF-A에 의한 림프관신생과 파수꾼 림프절 전이를 억제할 수 있는 새로운 후보 물질을 찾기 위해 한국천연물질은행 (NPBANK)로부터 640종의 천연 물질을 제공받아 VEGF-A에 의해 유도되는 림프관신생을 150% 이상 감소하는 25가지의 후보물질을 선별하였다. 첫번째 스크리닝 후, VEGF-A에 의해 유도되는 HLMEC 증식을 50 ~ 100%까지 억제할 뿐만 아니라 HLMEC에 세포 독성이 없는 11가지의 후보물질을 선별하였다. 두번째 스크리닝 후 11가지의 후보 물질 모두가 VEGF-A에 의해 유도 되는 HLMEC의 이동을 50 ~ 100%까지 저해한다는 것을 확인하여 참고 문헌 조사를 통해 구강암에서 림프관신생과 림프절 전이에 아직 활성이 보고되지 않은 10가지의 신규한 천연 물질을 선별하였다. 선별된 10가지의 천연물질 중 가장 큰 효과를 보인 3-O-acetyloleanolic acid (3AOA)와 6,8-Diprenylgenistein (6,8-DG)가 림프관신생과 림프절 전이에 미치는 영향을 in vitro 및 in vivo에서 조사하였다. VEGF-A에 의해 증가된 HLMEC의 증식, 이동 그리고 림프관 형성은 3AOA 또는 6,8-DG 처리에 의해 현저하게 감소되었으며, CoCl₂가 처리된 SCCVII 세포에서 구강암의 주요 lymphangiogenic factor인 VEGF-A의 발현을 억제하였다. 3AOA 및 6,8-DG는 모두 HLMEC에서 VEGF-A에 의해 자극되는 VEGFR-1 및 VEGFR-2의 인산화 및 발현을 억제 할 뿐만 아니라 FAK, PI3K, AKT, p38 및 ERK와 같은 림프관신생 관련 하위 신호 전달 인자의 활성화를 억제하였다. 특히, 6,8-DG 의 경우 CoCl₂가 처리 된 SCCVII 세포에서 VEGF-A의 발현과 관련된 hypoxia-inducible factor인 HIF-1α의 발현을 억제하고 HLMEC에서 VEGF-A와 VEGFR-2의 결합을 방해하는 것으로 확인되었다. VEGF-A가 과발현되는 OCSLN 동물모델에서, 3AOA 및 6,8-DG는 종양에서 유도 되는 림프관신생과 파수꾼 림프절 전이를 억제하는 것을 확인하였다. 이러한 결과는 VEGF-A가 구강암의 림프관신생 및 림프절 전이에 작용하는 주된 lymphangiogenic factor이며 3AOA와 6,8-DG가 VEGF-A에 의해 유도되는 림프관신생 및 림프절 전이를 억제한다는 것을 보여주며, 3AOA와 6,8-DG가 구강암의 치료와 림프절 전이 억제를 위한 새로운 치료제가 될 수 있는 가능성을 보여준다.