대두를 무염 발효하는 과정에서 생산되는 surfactin을 최대로 생산할 수 있는 발효시간과 생산량을 간단하게 확인할 수 있는 품질지표로 사용할 대체 실험을 탐색하여 대량생산 시 활용할 수 있는 지표를 설정하였다. 총 48 h까지 발효를 진행하였으며 무염 발효 대두 (NFS) 발효 시 사용하기 적합한 배지는 tryptic soy broth였다. 발효시간별 무염 발효 대두 (NFS)의 미생물 변화량은 발효시간에 따라 증가함을 나타내었으며 24 h (9.66±0.16 log CFU/g) 이상부터 유의적인 증가율을 나타내지 못하였다. 중량의 경우 시간이 지속됨에 따라 수분 증발의 발생으로 12 h 97.2 %, 48 h 89.1%의 감소를 보였다.
NFS 점질물을 회수하여 품질지표로 사용할 이화학 실험을 진행한 결과 pH와 색차는 암모니아 가스 생성과 수분의 증발로 48 h pH 6.86±0.08로 증가, △E 34.09±1.82로 0 h부터 오차 값이 증가하였다. 가용성 고형분과 단백질 (280 nm) 측정은 동일한 경향을 보였으며 36 h에서 1.4 ˚Brix, 0.290±0.001의 증가율을 보였지만 이후 발효시간대에선 유의적인 증가량을 보이지 못하였다. 계면활성제의 정도를 확인하기 위해 표면 장력 측정계로 측정한 결과 24 h부터 임계 미셀 농도로 인해 유의적인 감소능을 나타내지 않았다. 환원당은 초기 균주의 축적으로 12 h 1.349±0.026 mg/mL로 최댓값을 나타낸 후부터 48 h까지 지속적으로 감소하는 이상적인 결과를 보였다. 단백질 함량의 경우 BCA assay 방법이 NFS 샘플에 적합한 실험법으로 확인되었으며 최종 발효 시간대에서도 지속적인 단백질 증가량을 나타내었다. 산침전과 HPLC 분석을 통해 도출해낸 surfactin 함량과 위의 실험들을 함께 비교하여 surfactin 최대 생산 시간대와 품질지표를 확인하였을 때 36 h에서 surfactin을 최대로 생산할 수 있었으며, 가용성 고형분 함량 측정 실험과 단백질 (280 nm) 측정 실험이 surfactin 함량과 동일한 경향을 나타난 것으로 확인되었다.