표제지
목차
ABSTRACT 9
제1장 서론 11
제1절 Horseradish peroxidase (HRP) 11
제2절 Deep Eutectic Solvent(DES) 12
제3절 Solvatochromic Parameter 14
제4절 DES의 조용매로서 HRP에 미치는 영향 16
제5절 연구목적 17
제2장 실험재료 및 방법 18
제1절 실험재료 18
제2절 HRP의 안정성과 활성에 DES가 미치는 영향 18
1. Deep Eutectic Solvent(DES) 제조 18
2. DES 포함 완충용액 제조 20
3. HRP의 활성에 DES가 미치는 영향 20
4. HRP의 안정성에 DES가 미치는 영향 20
5. DES 포함 완충 용액에서 HRP의 pH 안정성 측정 21
6. DES 형성 시간에 따른 HRP의 안정성 측정 21
제3절 DES의 물리화학적 특성 22
1. Solvatochromic parameter 22
2. Differential Scanning Calorimetry (DSC) 23
제4절 HRP의 구조적 특성 23
1. Soret band 측정 23
2. Circular Dichroism (CD) spectroscopy 23
제3장 결과 및 고찰 24
제1절 HRP의 안정성과 활성에 DES가 미치는 영향 24
1. DES의 제조 24
2. HRP의 활성에 DES가 미치는 영향 25
3. HRP의 안정성에 DES가 미치는 영향 27
4. DES 포함 완충 용액에서 HRP의 pH 안정성 측정 30
5. DES 농도에 따른 HRP의 안정성 측정 33
6. DES를 구성하는 각성분에 따른 HRP의 안정성 측정 36
7. DES 형성 시간에 따른 HRP의 안정성 측정 38
제2절 DES의 물리화학적 특성 40
1. Solvatochromic parameter 40
2. Differential Scanning Calorimetry (DSC) 44
제3절 DES로 인한 HRP의 구조적 특성 46
1. Soret band 측정 46
2. Circular Dichroism (CD) spectroscopy 50
제4장 결론 53
참고문헌 55
국문초록 62
〈Table 1〉 Mixing ratios of prepared DESs 19
〈Table 2〉 Solvatochromism parameter of various solvents at 25℃ 40
〈Figure 1〉 Relative activity of HRP in aqueous solution (0.17 M citric acid phosphate buffer, pH 6.0) containing 10% DES at 25℃. The activity... 26
〈Figure 2〉 Residual activity of HRP in aqueous solution (0.17 M citric acid phosphate buffer, pH 6.0) containing 10% DES after 24h incubation... 29
〈Figure 3〉 Residual activity of HRP after 2h incubation at 25℃ in aqueous solution (0.17 M citric acid phosphate buffer) containing 10%... 32
〈Figure 4〉 Residual activity of HRP after incubation (black bars: 3h, gray bars: 6h, and dark gray bars: 15h) at 25℃ in aqueous solution... 35
〈Figure 5〉 Effect of DES formation on the stability of HRP. Half-life time of HRP was measured at 25℃ in aqueous solution (0.17 M citric... 37
〈Figure 6〉 Effect of DES formation time on the stability of HRP. Residual activity of HRP was measured after 9 h incubation at 25℃ in... 39
〈Figure 7〉 Effect of DES formation time on the solvatochromic parameters (●: p*, ▲: a, ▼: b) of aqueous solution (0.17 M citric acid... 42
〈Figure 8〉 Time-dependent changes of p* value of aqueous solution (0.17 M citric acid phosphate buffer, pH 6.0) containing 80% DES (▼:... 43
〈Figure 9〉 Differential Scanning Calorimetry (DSC) of components of (a):BTG and (b):TTG (black: betaine or TMAO, blue: triethylene glycol,... 45
〈Figure 10〉 Changes of optical density at 403 nm of HRP in aqueous solution (0.17 M citric acid phosphate buffer, pH 6.0) containing 10%... 47
〈Figure 11〉 Spectrum of HRP in aqueous solution (0.17 M citric acid phosphate buffer, pH 6.0) containing 10% DES (▼: BTG, ▲: TTG).... 48
〈Figure 12〉 Correlation between residual activity (in Fig. 2) of HRP and △ soret band absorbance (%) in aqueous solution (0.17 M citric acid... 49
〈Figure 13〉 Secondary structure contents of HRP in aqueous solution (0.17 M citric acid phosphate buffer, pH 6.0) containing 10% DES after... 51
〈Figure 14〉 Circular dichroism spectroscopy spectrum of HRP in aqueous solution (0.17 M citric acid phosphate buffer, pH 6.0) containing... 52