여성 생식기계 발달은 배아 발생 중 복잡한 molecular process를 포함합니다. 본 연구에서는 mouse 배아줄기세포(ESCs)를 müllerian duct progenitor로 효과적으로 분화시키기 위한 단계적인 프로토콜을 제시합니다. Activin, BMP4, CHIR99021 및 Retinoic acid(RA)가 ESCs를 intermediate mesoderm과 coelomic epithelial lineage로 이끄는 주요 신호 인자로 확인되었습니다. 더 나아가 RA를 이후에 treating하는 것은 müllerian duct로의 명세화를 촉진했습니다. CHIR99021을 사용한 canonical Wnt activator와는 다른 Wnt activating factor에서 나타난 한계를 극복하면서 mesoderm linege로의 효율적인 방법으로 밝혀졌습니다. Wnt 활성화의 타이밍은 성공적인 분화에 중요하다는 것을 발견했는데, 특히 CHIR99021의 처리는 다른 early gastrulation시에 나타나는 lineage를 억제하며 T/Brachyury와 같은 초기 mesoderm marker를 확인하여 그 효율성을 입증했습니다. RA는 coelomic epithelium 및 müllerian duct에 대한 핵심적인 factor로 확인되었으며 müllerian duct progenitor의 운명을 결정하는 데 중추적인 역할을 강조했습니다. 본 연구는 müllerian duct 발달에 기여하는 정교한 신호 경로에 대한 통찰을 제공하여 여성 생식기계 기관 발생에 대한 우리의 이해에 기여하며 제시된 프로토콜은 잠재적인 발생생물학 연구를 위한 밑받침으로 사용될 수 있을 것으로 보입니다.