표제지
목차
ABSTRACT 9
제1장 서론 11
제1절 리보스위치 (Riboswitch) 11
제2절 무세포 단백질 합성 시스템 (Cell-free protein synthesis, CFPS) 13
제3절 리보스위치(Riboswitch)기반 무세포 단백질 합성을 통한 진단법 15
제4절 연구목적 17
제2장 실험 재료 및 방법 20
제1절 실험재료 20
제2절 Split T7 switch 제작 21
1. 신호단백질 서열 PCR 진행 후 농축 21
2. Annealing product 제작 및 ligation 진행 22
제3절 무세포 단백질 합성 반응 조건 26
제3장 결과 및 고찰 28
제1절 sfGFP 형광신호를 통한 HPV16형 L1gene 검출 28
1. 전체적인 계략도 28
2. 유효성확인 30
3. 최적화 34
4. 민감도 및 특이도 39
제2절 분할 형광신호를 통한 HPV18형 L1 gene 검출 41
1. 전체적인 계략도 41
2. 유효성 확인 44
제3절 비색신호를 통한 SARS-CoV-2 N gene 검출 47
1. 전체적인 계략도 47
2. 유효성확인 50
제4장 결론 51
참고문헌 53
국문초록 56
Table 1. Oligonucleotides used in this study 24
Figure 1. Illustration of riboswitch 12
Figure 2. Split T7 switch based cell-free reaction workflow. 19
Figure 3. Schematic illustration of SP1 synthesis process using T4 DNA ligase 23
Figure 4. Comparison of double stranded T7 promoter and split T7 promoter. 32
Figure 5. Three-way junction construction confirmation for HPV type16 L1 gene Locus2. 33
Figure 6. Split T7 switch construction and feasibility. 36
Figure 7. Mega11 multiple gene alignment result 37
Figure 8. Optimization of split T7 switch based cell-free reaction to detect HPV type16 L1 gene. 38
Figure 9. Low detection limit of split T7 switch based cell-free reaction. 40
Figure 10. Schematic illustration of spilt T7 switch using self-complementation of GFP1/10 and GFP11. 43
Figure 11. Construction and feasibility of split T7 switch encoding split sfGFP11 for detection HPV type18 L1 gene. 45
Figure 12. The fluorescence intensity fold change resulting from the self- complementation of split GFP when targeting three loci of the HPV type 18 L1 gene. 46
Figure 13. Detection of the SARS-CoV-2-N gene using the split T7 switch encoding lacZ alpha domain for colorimetry. 48