후박 (Magnolia officinalis), 갈근 (Pueraria lobata), 감초 (Glycyrrhiza uralensis) 및 대극(Euphorbia
pekinensis)은 염증성질병을 포함한 다양한 질병을 치료하기 위해 사용되었다. 본 실험에서는 각각의 천연물의
복합추출물인 KIOM-79가 큰포식세포에서 inducible NO synthase (iNOS) 유전자의 발현을 억제시키는 기전을 밝
혀내기 위하여 면역형광염색, RT-PCR, electrophoretic mobility shift assay (EMSA) 등을 실시하였다. 면역형광염
색 소견을 보면 RAW 264.7 세포에 lipopolysaccharide (LPS)에 의해 유도된 iNOS 단백질의 발현이 KIOM-79에
의해 억제되는 것을 알 수 있다. Western blot과 RT-PCR 분석에 의하면 KIOM-79가 LPS에 의한 iNOS의 발현
을 억제함을 확인 할 수 있다. LPS와 KIOM-79를 처리한 RAW 264.7 세포에서 nuclear extract를 추출하여
EMSA로 분석한 결과, LPS에 의해 유도된 NF-κB/Rel의 DNA 결합이 KIOM-79에 의해 억제됨을 확인하였다.
면역형광염색 소견을 보면 NF-κB/Rel의 구성단백질 중의 하나인 p65단백질은 세포질에서 발현되고 있으며,
LPS를 처리하면 p65가 핵으로 이동함을 알 수 있다. 이때 KIOM-79를 처리하면 LPS에 의한 p65의 핵 내 이동
이 억제됨을 확인할 수 있다. 결론적으로, KIOM-79는 큰포식세포에 작용해 iNOS 유전자의 발현을 억제하며, 이
러한 큰포식세포의 활성억제는 p65 단백질의 핵 내 이동 억제를 통해서 유도되는 것으로 사료된다.We demonstrate that KIOM-79, combined extracts isolated from Magnolia officinalis, Pueraria
lobata, Glycyrrhiza uralensis, and Euphorbia pekinensis, inhibits LPS-induced expression of iNOS gene in RAW
264.7 cells. Treatment of RAW 264.7 cells with KIOM-79 inhibited LPS-stimulated nitric oxide production in a doserelated
manner. Immunohisto-chemical staining of iNOS and RT-PCR analysis showed that the decrease of NO was
due to the inhibition of iNOS gene expression. Immunostaining of p65 and EMSA showed that KIOM-79 inhibited
NF-κ/Rel nuclear translocation and DNA binding, respectively. Collectively, this series of experiments indicates that
KIOM inhibits iNOS gene expression by blocking NF-κ/Rel. Due to the critical role that NO release plays in
mediating inflammatory responses, the inhibitory effects of KIOM-79 on iNOS suggest that KIOM-79 may represent a
useful anti-inflammatory agent.