표제지
제출문
목차
콩 유전자 기능 조기 검정을 위한 VIRUS-INDUCED GENE SILENCING 시스템 개발 5
Summary 5
I. 서언 7
II. 연구사 10
III. 재료 및 방법 12
1. 콩에 VIGS를 유도하기 위한 Tobacco rattle virus (TRV) 벡터 제작 12
2. 콩에 VIGS를 유도하기 위한 Pea early browning virus (PEBV) 벡터 제작 12
3. 콩에 VIGS를 유도하기 위한 Cucumber mosaic virus (CMV) 벡터 제작 13
4. 콩에 VIGS를 유도하기 위한 Soybean mosaic virus (SMV) 벡터 제작 13
5. VIGS의 안정성 및 효율 극대화를 위한 접종방법 개발 13
6. VIGS 발현에 영향을 미치는 환경요인 평가 13
7. Subtractive cloning과 DDRT-PCR을 통해 대량 선발 14
IV. 결과 및 고찰 16
1. TRV-based VIGS 벡터의 제작 및 유전자 침묵에 대한 효율 극대화를 위한 접종방법 개발 16
2. PEBV-based VIGS 벡터의 개발 및 유전자 침묵 효과 검증 22
3. CMV-based VIGS 벡터 및 SMV-based VIGS 벡터의 개발 23
4. VIGS에 영향을 미치는 환경요인 평가 36
5. SMV-G7H에 저항성인 콩에서 발현이 유도되는 유전자 선발 36
6. VIGS 벡터를 이용한 유용유전자 대량 식물검정 37
V. 적요 43
VI. 인용문헌 44
표 1.subtractive cloning 및 DDRT-PCR을 통해 콩에서 선발한 저항성 관련 유전자. 39
그림 1. Agrobacterium의 접종방법들... 15
그림 2. Tobacco rattle virus (TRV) VIGS vector 18
그림 3. TRV벡터에 삽입된 PDS 마커의 기능을 검정하기 위한 접종실험 마커가 삽입된 클론(좌)과 삽입하지 않은 벡터(우)만 접종한 Nicotiana benthamiana식물. 19
그림 4. TRV CP를 probe로 한 Southern blot... 20
그림 5. TRV 벡터를 이용한 콩에서의 silencing 유도를 위한 접종방법.... 21
그림 6. 건전한 콩과 pTRV2:GmPDS를 접종한 silencing 콩에서의 PDS, beta-tublin, TRV-CP, TRV-RdRp의 발현양상 차이. 24
그림 7. PEBV-based binary 벡터. 25
그림 8. RT-PCR을 통한 SMV 및 CMV 감염의 검출.... 26
그림 9. CMV-based 벡터의 genome organization. 29
그림 10. CMV-based 벡터의 식물체 내 증식.... 30
그림 11. CMV-based 벡터를 이용한 GFP의 과발현.... 31
그림 12. SSV-based 벡터의 식물체 내 증식.... 32
그림 13. 감염 가능한 SMV 클론 제작과정.... 33
그림 14. SMV-based 벡터의 genome organization 34
그림 15. SMV-based 벡터의 식물체 내 증식.... 35
그림 16. 저항성 관련 유전자를 screening하기 위한 Differential Display RT-PCR (DDRT-PCT)의 개요. 38
그림 17. SSV-based 벡터 VIGS 시스템에서 저항성 선발 유전자를 silencing 시키기 위한 구조의 모식도. 40
그림 18. SMV-based 벡터 VIGS 시스템에서 표지마커의 발현 및 저항성 선발 유전자를 silencing 시키기 위한 구조의 모식도. 41