[표지]
요약문
목차
Abstract 9
I. 서론 10
II. 연구내용 및 방법 12
1. B. thuringiensis에서 Cry1Ac 유전자 분리 12
가. Cry 살충단백질 생성균 배양 12
나. PCR을 이용하여 Cry 살충 유전자 분리 12
다. T-blunt 벡터에 클로닝 후 염기서열 분석 12
2. Cry1Ac 유전자의 결실 돌연변이체 제조 13
가. PCR을 이용한 결실 돌연변이체 제조 13
나. T-blunt 벡터에 클로닝 후 염기서열 분석 13
다. 단백질 발현용 벡터인 pET28a 벡터에 클로닝 14
라. BL21 DE3 E. coli에 유전자 도입 14
마. Cry 살충 단백질 발현 테스트 14
3. Cry1Ac 단백질 분리 15
가. Cry 유전자가 도입된 대장균 대량 배양 15
나. Ni-NTA column을 이용한 단백질 분리 16
III. 연구결과 및 고찰 17
1. B. thuringiensis로부터 Cry1Ac 유전자 분리 17
2. Cry1Ac 결실 돌연변이체 유전자 분리 22
3. Cry1Ac 단백질 분리 25
IV. 결론 28
참고문헌 30
표 1. 사용된 프라이머 리스트 17
그림 1. PCR을 이용한 Cry1Ac 유전자 증폭 17
그림 2. 색깔 선별과 콜로니 PCR을 이용한 T-blunt Cry1Ac construct의 선별 18
그림 3. 분리된 Cry1Ac 유전자의 염기서열 비교 분석 22
그림 4. Cry1Ac의 전장과 결실 돌연변이의 모식도 22
그림 5. PCR을 통한 Cry1Ac 결실 돌연변이 결과물의 0.8% 아가로스 전기영동 결과 23
그림 6. 색깔 선별과 제한효소 절단에 의한 T-blunt Cry1Ac 결실 돌연변이의 확인 24
그림 7. 단백질 발현용 pET28a 벡터의 Multi-cloning site 염기서열 24
그림 8. 제한효소 절단을 통한 pET28a-Cry1Ac full과 결실 돌연변이체의 확인 25
그림 9. 수용성 분획에서 Cry1Ac 단백질의 발현 테스트 확인 26
그림 10. 비수용성 분획에서 Cry1Ac 단백질의 발현 테스트 확인 26
그림 11. 수용성 분획으로부터 친화성 순수분리 방법으로 분리한 Cry1Ac D3 단백질 27
그림 12. 비수용성 분획으로부터 친화성 순수분리 방법으로 분리한 Cry1Ac full과 D2 단백질 27