[표지]
요약문
목차
Abstract 12
I. 서론 13
II. 연구내용 및 방법 30
1. 국외 LMO 검출기법 관련 자료 조사 30
가. 유럽표준물질연구소 등의 공인기관 자료 조사 및 관련 연구동향 파악 30
2. 표준물질 및 LM 작물별 유전정보 확보 30
가. 6개 LMO에 대한 표준물질 확보 30
나. 국내 유통 LMO의 도입유전자 정보 조사 32
3. 유전체 DNA 순수 분리 및 프라이머 확보 34
가. 구입한 표준물질로부터 유전체 DNA 분리 34
나. 이벤트 검출을 위한 특이 프라이머 제작 35
4. LM 검출 PCR 조건 확립 35
가. 유전자 증폭 실험(Polymerase Chain Reaction, PCR) 35
나. 전기영동 36
5. 검출한계 최저농도 확인 37
가. 유전자 증폭 실험(Polymerase Chain Reaction, PCR) 37
나. 전기영동 39
6. LM 작물 도입유전자의 주변염기서열 분석 39
가. 이벤트 검출반응 후 생성물의 염기 서열 정보 분석 39
나. 식물 유전체 내 도입유전자의 삽입 위치 확인 41
7. 자체적인 최적검출 기법확립 42
III. 연구결과 및 고찰 43
1. 국외 LMO 검출기법 관련 자료 조사 43
가. 유럽표준물질연구소 등의 공인기관 자료 조사 및 관련 연구동향 파악 43
2. 표준물질 및 LM 작물별 유전정보 확보 43
가. 표준물질 확보 43
나. 국내 유통 LMO의 도입유전자 정보 조사 44
3. 유전체 DNA 순수 분리 및 특이적 프라이머 설계 45
가. 구입한 표준물질로부터 유전체 DNA 분리 45
나. 이벤트 검출을 위한 특이 프라이머 제작 46
4. LM 검출 PCR 조건 확립 48
가. 콩, 옥수수, 유채에 대한 내재유전자 검출기법 확립 48
나. 6개 LM 이벤트의 검출기법 확립 49
5. 검출한계 최저농도 확인 53
6. LM 작물 도입유전자의 주변염기서열 분석 58
가. 이벤트 검출반응 후 생성물의 염기 서열 정보 분석 58
나. 식물 유전체 내 도입유전자의 삽입 위치 확인 59
7. 자체적인 최적검출 기법확립 68
IV. 결론 및 제언 71
참고문헌 73
부록 76
1. 중간보고서 평가의견 반영 결과 76
2. 연구결과활용 79
표 1. 2014년 국가별 세계 유전자변형작물 재배 현황 14
표 2. 우리나라 LMO 위해성 심사승인 현황 17
표 3. 국내 최근 LMO 발견 현황 26
표 4. 40개 LM 작물의 검출기법 확립 현황 27
표 5. IRMM으로부터 확보한 3개 LM 표준물질 31
표 6. AOCS로부터 확보한 3개 LM 표준물질 32
표 7. 6개 LM 이벤트별 도입유전자 모식도 33
표 8. LMO 검출 시 이용한 PCR 반응 조건 36
표 9. 검출한계 실험에 이용한 유전체 DNA 농도 38
표 10. 검출한계 실험시 이용한 PCR 조성 및 용량 38
표 11. T-Blunt vector를 이용한 중합반응 조건 40
표 12. 6개 이벤트의 기본정보 43
표 13. IRMM과 AOCS로부터 확보한 표준물질 44
표 14. 6개 LM 작물의 특성 및 도입된 유전자 45
표 15. 6개 작물을 검출하기 위한 프라이머 제작 47
표 16. 작물별 내재유전자의 염기서열 정보 및 생성물 크기 48
표 17. 검출한계 최저농도 검증을 위한 유전체 DNA 농도 54
표 18. 6개 LM 이벤트의 PCR 최종생성물 염기서열 분석 58
표 19. 도입유전자 삽입 위치 확인을 위한 프라이머 제작 63
그림 1. 전세계 유전자변형 작물 재배 현황 13
그림 2. 주요 4대 작물 재배 면적 15
그림 3. 도입형질별 재배 면적 16
그림 4. 국내 LMO 수입 현황 25
그림 5. IRMM으로부터 확보한 3개 LM 표준물질 31
그림 6. AOCS로부터 확보한 3개 LM 표준물질 32
그림 7. 시료 균질기 34
그림 8. LMO 검출을 위한 PCR 반응 조건 확립 36
그림 9. 분자 마커(왼쪽)와 전기영동(오른쪽) 장치 37
그림 10. PCR 증폭결과 확인을 위한 ChemiDoc XRS 시스템 37
그림 11. 검출한계 농도 확인을 위한 PCR 반응 조건 38
그림 12. 클로닝(Cloning)에 사용된 T-Blunt vector 정보 39
그림 13. 형질전환을 위한 열충격장치와 진탕배양기 40
그림 14. 표준물질로부터 정제한 유전체 DNA 46
그림 15. 정제한 유전체 DNA를 이용한 DNA 추출 확인 실험 46
그림 16. LM 작물 검출을 위한 특이 프라이머의 확보 47
그림 17. MON87708 검출 조건 및 프라이머 서열 정보 50
그림 18. DAS-68416-4 검출 조건 및 프라이머 서열 정보 50
그림 19. DAS-44406-6 검출 조건 및 프라이머 서열 정보 51
그림 20. MON87769 검출 조건 및 프라이머 서열 정보 51
그림 21. DAS-40278-9 검출 조건 및 프라이머 서열 정보 52
그림 22. MON88302 검출 조건 및 프라이머 서열 정보 53
그림 23. MON87708의 검출최저 농도 확인 55
그림 24. DAS-68416-4의 검출최저 농도 확인 55
그림 25. DAS-44406-6의 검출최저 농도 확인 56
그림 26. MON87769의 검출최저 농도 확인 56
그림 27. DAS-40278-9의 검출최저 농도 확인 57
그림 28. MON88302의 검출최저 농도 확인 57
그림 29. DAS-44406-6의 식물 유전체 염기서열 검색 60
그림 30. 식물체에서 DAS-44406-6 검출시 사용된 정방향 프라이머 염기서열 검색 61
그림 31. 식물체에서 MON88302 검출시 사용된 정방향 프라이머 염기서열 검색 62
그림 32. 새로 제작한 프라이머를 이용하여 DAS-44406-6 검출확인 63
그림 33. 새로 제작한 프라이머를 이용하여 MON88302 검출확인 64
그림 34. DAS-44406-6 삽입유전자 위치 분석 65
그림 35. DAS-44406-6 삽입유전자 위치 분석 결과 65
그림 36. MON88302 삽입유전자 위치 분석 66
그림 37. MON88302 삽입유전자 위치 분석 결과 67
그림 38. DAS-44406-6 자체적인 검출기법 확립 69
그림 39. MON88302 자체적인 검출기법 확립 70