[표지] 1
목차 2
I. 식물 원형질체란? 4
1. 정의 4
2. 이용 4
II. 현사시나무의 잎에서 원형질체 분리 5
1. 원형질체 분리를 위한 기내 식물체 준비 5
2. 잎의 세포벽 제거를 위한 효소용액 처리 5
3. 원형질체의 정제 7
III. 현사시나무의 유전자 교정을 위한 리보핵산단백질 준비 9
1. Stress-Associated Protein 1 (SAP1)의 교정을 위한 sgRNA 설계 9
2. SAP1 sgRNA의 합성 및 정제 9
3. In vitro cleavage 분석 12
IV. 현사시나무의 원형질체에 리보핵산단백질의 도입 15
1. 리보핵산단백질의 준비 15
2. PEG(Polyethylene glycol)을 이용한 리보핵산단백질의 세포내 도입 15
V. 현사시나무에서 SAP1 유전자의 편집 검증 16
1. 염색체 DNA 분리 16
2. SAP1 유전자 교정 분석을 위한 표적 DNA 단편 분리 16
3. DNA 서열 결정 16
4. 표적 유전자의 염기서열 편집 검정 18
판권기 24
[뒷표지] 24
표 1. 원형질체 분리에 사용되는 시약 조성 19
표 2. 원형질체 분리를 위한 효소용액 20
표 3. 원형질체 분리배지 조성 21
표 4. Evan's Blue 염색액 조성 22
표 5. PEG를 이용한 리보핵산단백질의 세포내 도입 용액 22
표 6. SAP1의 DNA 염기서열 분석을 위한 PCR 프라이머 23
그림 1. 현사시나무의 원형질체 (A)와 세포내 도입 물질의 예(B, C) 4
그림 2. 현사시나무로부터 원형질체 분리 과정 6
그림 3. 헤마사이토미터를 이용한 세포 수 측정 8
그림 4. Cas-Designer를 이용해 선발한 SAP1 sgRNA의 서열 (A) 및 sgRNA 합성을 위한 forward primer 서열(B) 11
그림 5. SAP1 sgRNA 선발을 위한 In vitro cleavage 분석 14
그림 6. 현사시나무에서 SAP1 유전자의 DNA 단편 증폭 17
그림 7. 현사시나무에서 SAP1 유전자의 염기서열 편집 18