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영문요약

Contents

INTRODUCTION 7

MATERIALS AND METHODS 9

Collection of samples and cell culture 9

Human rhinovirus-16 infection 9

Determination of successful RV infection by seminested RT-PCR of RV-16 10

Measurement of TER 10

RNA isolation and real-time RT-PCR 11

Western blot analysis 12

Statistical analysis 12

RESULTS 13

RV infection rate in the primary nasal epithelial cells 13

Effects of RV infection on TER of the primary nasal epithelial cells 13

Effects of RV infection on the levels of mRNA and protein for junctional molecules in the primary nasal epithelial cells 13

DISCUSSION 14

CONCLUSION 18

REFERENCES 19

국문요약 22

List of Tables

Table 1. Sequences of RT-PCR primer used to amplify junctional proteins mRNA 23

List of Figures

Fig. 1. Seminested reverse transcriptase-polymerase chain reaction of rhinovirus 16. Successful infection with RV was confirmed by positive identification of the 292-bp RV-specific RT-PCR band (RV: rhinovirus, bp:base pair). 24

Fig. 2. Effects of rhinovirus infection on transepithelial resistance in the primary nasal epithelial cells. The mean transepithelial resistance (TER) of the control group was 143.1±37.5Ω/㎠, and that of rhinovirus (RV) infected group was 122.6±40.1Ω/㎠. This decrease in TER in the RV infected group compared with controls was statistically... 25

Fig. 3. Effects of rhinovirus infection on mRNA levels of junctional molecules in the primary nasal epithelial cells. The levels of mRNA for epithelial tight junction molecules were determined using real-time PCR. The mRNA level of each gene was normalized to the expression of β-actin. Rhinovirus (RV) infection significantly decreased the expression of... 26

Fig. 4. Effects of rhinovirus infection on protein levels of junction molecules in the primary nasal epithelial cells. The protein levels of epithelial tight junction molecules were determined by Western blot analysis. A, Specific protein bands corresponding to ZO-1, occludin, claudin-1, E-cadherin and β-actin are indicated. B, Results were quantified by... 27

초록보기

연구배경 및 목적: 리노바이러스(RV)에 의한 상기도염은 중이염이나 부비동염의 합병증을 일으키며 천식을 포함한 만성 폐쇄성 폐질환을 악화시킬 수 있다는 점에서 임상적으로 중요한 질환이다. 그러나, RV 감염으로 인한 혈관 투과성 증가와 과다분비에 대한 병태생리적 기전에 대한 국내외 연구결과는 매우 부족한 실정이다. 이에 저자는 실험실 환경에서 비강상피세포에 대한 RV 감염이 코점막의 방어막 기전에 중요한 tight junction 및 adherens junction 구성 단백질의 변화에 미치는 영향 및 기능적인 변화 여부를 알아보고자 하였다. 대상 및 연구방법: 만성 비후성 비염으로 비갑개 성형술을 시행받는 환자에서 채취한 비갑개 점막에서 비상피세포의 초대 배양을 시행하였다. Confluence가 되면 air interface transwell에 subculture를 시행한 후 RV감염을 시켰다. 2 일 후 세포 상층액으로 one-step RT-PCR시행하여 RV 감염여부를 확인한 뒤 voltmeter로 대조군과 RV감염군의 경상피저항(TER)을 측정한 다음, RNA와 protein을 추출하여 ZO-1, occludin, claudin-1, E-cadherin에 대한 real time RT-PCR과 western blot analysis를 시행하였다. 결과: RV의 TER은 122.6Ω /cm2 으로 대조군의 143.1Ω /cm2 에 비해서 통계적으로 유의하게 감소하는 양상을 보였다. Real time RT-PCR 결과 RV 감염군에서 대조군보다 통계적으로 유의하게 ZO-1, occludin, claudin-1, E-cadherin의 mRNA level이 감소하는 양상을 보였다 (감소율: 35.8%, 48.2%, 43.8%, 43.7%). Western blot analysis에서도 RV 감염군에서 대조군에 비해 ZO-1, occludin, claudin-1, E-cadherin의 단백질 발현량이 감소하는 양상을 보였다. (감소율: 16.4%, 33.6%, 23.8%, 21.4%). 하지만 RNA와 달리 단백질은 occludin만 통계적으로 유의한 변화양상을 나타내었다. 결론: RV는 비강 세포에서 tight junction과 adherens junction의 구성성분인 ZO-1, occludin, claudin-1, Ecadherin에 영향을 미쳐 TER을 감소시켰다. 이러한 결과는 RV에 의해 비강 상피세포 방어막 파괴효과로 비강 내 점액 과다 분비 및 비점막 충혈이 악화되며, 또한 이차적인 세균감염이 촉진될 수 있음을 시사한다.

참고문헌 (29건) : 자료제공( 네이버학술정보 )

참고문헌 목록에 대한 테이블로 번호, 참고문헌, 국회도서관 소장유무로 구성되어 있습니다.
번호 참고문헌 국회도서관 소장유무
1 Rhinovirus Infections in an Industrial Population 네이버 미소장
2 Respiratory consequences of rhinovirus infection. 네이버 미소장
3 Rhinovirus infection of primary cultures of human tracheal epithelium: role of ICAM-1 and IL-1� 네이버 미소장
4 Rhinovirus infection induces mucus hypersecretion. 네이버 미소장
5 Rhinovirus disrupts the barrier function of polarized airway epithelial cells. 네이버 미소장
6 Rhinovirus enhances various bacterial adhesions to nasal epithelial cells simultaneously. 네이버 미소장
7 The immune response in adenoids and tonsils. 네이버 미소장
8 Changes of gap and tight junctions during differentiation of human nasal epithelial cells using primary human nasal epithelial cells and primary human nasal fibroblast cells in a noncontact coculture system. J Membr Biol 2007;218:1-7. 미소장
9 Breaking through the Tight Junction Barrier 네이버 미소장
10 The tight junction: a multifunctional complex 네이버 미소장
11 HLA-DR- and CD11c-positive dendritic cells penetrate beyond well-developed epithelial tight junctions in human nasal mucosa of allergic rhinitis. 네이버 미소장
12 The Role of the Cell Adhesion Molecule Uvomorulin in the Formation and Maintenance of the Epithelial Junctional Complex 네이버 미소장
13 Depletion of E-cadherin disrupts establishment but not maintenance of cell junctions in Madin-Darby canine kidney epithelial cells. 네이버 미소장
14 Application of measurements of transepithelial electrical resistance of intestinal epithelial cell monolayers to evaluate probiotic activity. 네이버 미소장
15 The tight junction protein ZO-1 establishes a link between the transmembrane protein occludin and the actin cytoskeleton. 네이버 미소장
16 Structural and signalling molecules come together at tight junctions. 네이버 미소장
17 Rotavirus alters paracellular permeability and energy metabolism in Caco-2 cells. 네이버 미소장
18 Morphological factors influencing transepithelial permeability: a model for the resistance of the zonula occludens. J Membr Biol 1978;39:219-32. 미소장
19 Regulation of airway tight junctions by proinflammatory cytokines. 네이버 미소장
20 Evaluation 네이버 미소장
21 Functional Dissociation of Paracellular Permeability and Transepithelial Electrical Resistance and Disruption of the Apical-Basolateral Intramembrane Diffusion Barrier by Expression of a Mutant Tight Junction Membrane Protein 네이버 미소장
22 Altered permeability in inflammatory bowel disease: pathophysiology and clinical implications. 네이버 미소장
23 Localization of ZO-1 and E-cadherin in the nasal polyp epithelium. 네이버 미소장
24 Histamine alters gene expression in cultured human nasal epithelial cells 네이버 미소장
25 Quantitative structural and biochemical analyses of tight junction dynamics following exposure of epithelial cells to house dust mite allergen Der p 1 네이버 미소장
26 Overexpression of occludin, a tight junction-associated integral membrane protein, induces the formation of intracellular multilamellar bodies bearing tight junction-like structures. 네이버 미소장
27 Astrovirus increases epithelial barrier permeability independently of viral replication. 네이버 미소장
28 Astrovirus induces diarrhea in the absence of inflammation and cell death. 네이버 미소장
29 Structural requirements of astrovirus virus-like particles assembled in insect cells. 네이버 미소장

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