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표제지

목차

I. 서론 6

II. 재료 및 방법 8

1. In vivo : 가감보양환오탕의 뇌허혈에 미치는 영향 8

1) 재료 8

(1) 동물 8

(2) 약재 8

2) 방법 10

(1) 국소적 뇌허혈 유발 및 약물투여 10

(2) TTC 염색 10

(3) 뇌경색의 부피 및 뇌부종의 측정 10

(4) 면역조직화학적염색 11

(5) 실험결과의 분석 11

2. In vitro : 가감보양환오탕의 뇌신경교세포에 대한 항염증 효과 12

1) 재료 12

(1) 약재 12

(2) 세포배양 12

2) 방법 12

(1) MTT assay 12

(2) Nitric oxide 측정 13

(3) Cytokine의 측정 13

(4) iNOS 및 cytokine의 유전자 발현 조사 13

(5) iNOS의 단백질 발현 조사 14

(6) 통계학적 검정 14

3. In vitro : 가감보양환오탕의 뇌신경세포에 대한 신경보호효과 15

1) 재료 15

(1) 약재 15

(2) 세포배양 15

2) 방법 15

(1) Free radical 제거효과 검정 15

(2) MTT assay 15

(3) 신경세포의 oxidative damage 유발 16

(4) 신경세포 보호효과 16

(5) DNA fragmentation 분석 16

(6) 통계학적 검정 16

III. 결과 17

1. In vivo : 가감보양환오탕의 뇌허혈에 미치는 영향 17

1) TTC 염색소견 17

2) 뇌경색 부피 19

3) Microglia의 변화 22

2. In vitro : 가감보양환오탕의 뇌신경교세포에 대한 항염증 효과 25

1) 가감보양환오탕의 세포독성에 대한 영향 25

2) 가감보양환오탕의 NO 생성억제효과 28

3) 가감보양환오탕의 TNF-α 생성억제효과 31

4) 가감보양환오탕의 IL-1β 생성억제효과 33

5) 가감보양환오탕의 iNOS 및 cytokine mRNA 발현 억제효과 35

6) 가감보양환오탕의 iNOS 단백질 발현 억제효과 38

3. In vitro : 가감보양환오탕의 뇌신경세포에 대한 신경보호효과 40

1) 가감보양환오탕의 DPPH free radical 소거효과 40

2) 가감보양환오탕의 신경세포독성 검정 40

3) 가감보양환오탕의 신경세포 보효효능 43

4) 가감보양환오탕의 신경세포의 DNA fragmentation에 미치는 영향 46

IV. 고찰 48

V. 결론 53

참고문헌 54

Abstract 58

List of Table

Table 1. The amount and composition of BHT. 9

Table 2. Cerebral infarction/total hemisphere percentage of rats following the MCA occlusion. 20

List of Figure

Fig. 1. Coronal section of brain slice from occlusion of the left middle cerebral artery rats. 18

Fig. 2. Cerebral infarction/total hemisphere infarction(%) of rats following the MCA occlusion. 21

Fig. 3. Immunohistochemical staining with Isolectin for microglia in striatum area of ischemia rats. 23

Fig. 4. Immunohistochemical staining with iNOS in ischemia rats. 24

Fig. 5. Cytotoxic effects of BHT in BV2 cells. 26

Fig. 6. Cytotoxic effects of BHT in primary microglia. 27

Fig. 7. Inhibitory effect of BHT on the production of nitric oxide in LPS-stimulated BV2 cells. 29

Fig. 8. Inhibitory effects of BHT on the production of nitric oxide in LPS-stimulated primary microglia. 30

Fig. 9. Inhibitory effects of BHT on the production of TNF-α in LPS-stimulated BV2 cells (A) and primary microglia (B). 32

Fig. 10. Inhibitory effects of BHT on the production of IL-1β in LPS-stimulated BV2 cells (A) and primary microglia (B). 34

Fig. 11. Inhibitory effect of BHT on mRNA expression of iNOS in BV2 cells (A) and primary microglia (B) by RT-PCR. 36

Fig. 12. Inhibitory effects of BHT on mRNA expression of TNF-α and IL-1β in BV2 cells (A) and primary microglia (B) by RT-PCR. 37

Fig. 13. Inhibitory effects of BHT on protein expression of iNOS in BV2 cells (A) and primary microglia (B) by Western blot analysis. 39

Fig. 14. Scavenging effects of BHT on DPPH radical. 41

Fig. 15. Cell cytotoxicity of BHT in N2a cells. 42

Fig. 16. Cell cytotoxicity of H2O2 in N2a cells. 44

Fig. 17. Inhibitory effects of BHT on apoptotic N2a cells 45

Fig. 18. Effect of BHT on DNA fragmentation of N2a cells 47

초록보기

To evaluate the effects of modified Bo-Yang-Hwan-Oh-Tang(BHT) on stroke; 1) the anti-inflammatory effects were investigated through NO and proinflammatory cytokine production in BV2 and primary microglial cells, 2) the neuronal death protection effects were evaluated by MTT assay and DNA fragmentation in N2a neuroblastoma cells, and the therapeutic effects were identified in ischemia/reperfusion rat model.

In vivo

1. BHT extracts were significantly decreased the infarction volume compared with control group in ischemia/reperfusion rats.

2. BHT extracts were strongly inhibited microglial activation and iNOS expression compared with control group in ischemia/reperfusion rats.

In vitro

1. BHT extracts were significantly reduced the production of NO and pro-inflammatory cytokines including TNF-α and IL-1β from LPS-activated BV2 and microglial cells.

2. BHT extracts were greatly inhibited the iNOS gene expression from LPS-activated BV2 and microglial cells.

3. BHT extracts were showed DPPH free radical scavenging effects and neuronal death protection in hypoxia.

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