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Title Page
Contents
Abstract 5
Introduction 6
Materials and Methods 8
Tissue specimens, cancer cell lines and reagents 8
Semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) analysis 8
Immunoblotting 9
Cell cycle assay 9
Construction of expression plasmids, siRNA, and transfection 9
Statistical analysis 10
Results 11
ZNF313 expression is increased in cervical cancer cell lines 11
ZNF313 expression is increased in cervical tissue in a tumor-specific manner 11
ZNF313 protein levels and their associations with mRNA levels in cervical cancer cell lines 11
Genomic amplification of ZNF313 in cervical cancer cells 11
ZNF313 stimulates growth of human cervical tumor cells 12
ZNF313 promotes the G1 to S cell cycle transition 12
ZNF313 down-regulates p21WAF1 and p27KIP1 protein expression(이미지참조) 12
Figures 14
Discussion 21
References 24
국문초록 27
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배경: ZNF313은 염색체 20q13.3에 위치하는 유전자로써, 인간에게 나타나는 여러 종류의 암에서 증폭되어 있는 것이 발견되었다. ZNF313은 zinc-binding protein을 합성하고 E3 ligase 역할을 하는 Ring domain 을 가지고 있다. 하지만 ZNF313의 생물학적 역할과 암 유발 과정의 역할은 밝혀진 바 없다.
방법: 자궁경부암의 발병과정에서 ZNF313의 역할을 이해하기 위해서 세포주와 종양조직에서 ZNF313의 발현 상태를 분석하고 세포 성장에 대한 영향을 분석하였다.
결과: 정상조직과 비교했을 때, 8개의 세포주 중에서 5개의 세포주(62.5%)에서 비정상적으로 ZNF313 mRNA 발현이 증가되어 있는 것을 확인할 수 있었다. 또한 인접한 정상 조직과 비교했을 때 8개의 종양조직 중에서 6개의 종양조직(75%)에서 ZNF313 mRNA 발현이 증가되어 있었다. 또한 8개의 세포주 중 2개의 세포주(25%)에서 ZNF313 mRNA 발현과 ZNF313 유전자 양이 모두 증가되어 있어 ZNF313 발현증가가 유전자 증폭 또는 전사 단계에서 일어남을 알 수 있다. 실험에 사용한 4개의 세포주에서 ZNF313의 발현을 억제 시켰을 때 세포 성장이 의미있게 감소하였다. 유세포 분석법을 이용하였을 때, ZNF313의 발현과 억제에 의해서 세포주기 G1에서 S 단계로 변환이 각각 증가 또는 감소되는 결과를 얻을 수 있었고 이를 통해 ZNF313가 세포주기에 영향을 준다는 사실을 알 수 있었다. ZNF313 발현을 siRNA를 사용하여 차단하였을때 cyclin-dependent kinase inhibitors p21WAF1와 p27KIP 단백질이 현저하게 증가하는 것을 볼 수 있었다. 마지막으로 cycloheximide chase 실험은 ZNF313이 p21WAF1와 p27KIP의 단백질 안정성을 감소시킴을 보여주었다.
결론: 실험 결과들을 종합하였을 때, ZNF313은 세포주기를 촉진시키는 발암유전자 (proto-oncogene)로서 인체 자궁경부암에서 발현이 증가된다.
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