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Contents

I. Introduction 5

II. Materials and Methods 7

1. Preparation of Artemisia Capillaris (AC) extract 7

2. Cell culture of HepG2 cells 7

3. Cell viability assay 7

4. Free fatty acids (FFAs) and AC treatment 8

5. Oil Red O staining 8

6. Western blot analysis 8

7. Real-time quantitative PCR analysis 9

8. Statistical analysis 9

III. Results 10

1. Effects of FFAs and treatment on HepG2 cell viability 10

2. Effects of AC on steatosis 12

3. Effects of AC on p c-Jun NH₂-terminal kinase (pJNK) activation 14

4. Effects of AC on p-53-up-regulated mediator of apoptosis (PUMA) 15

5. Effects of AC on Bax, Bcl-2 and Caspase activation 18

IV. Discussion and Conclusion 21

References 25

Abstract 30

국문초록 31

초록보기

인진(茵蔯)은 간보호, 혈당 강하, 항염증 및 항비만 효과 등을 가지고 있어서 지방간염에 활용 가능한 약재이다. 본 연구에서는 HepG2 세포에 올레산과 팔미트산으로 구성된 유리지방산을 처리하여 지방간염의 in vitro모델을 설정한 후 인진(茵蔯) 에탄올 추출물을 투여하였을 때 지방증 및 세포자멸사의 개선 효과에 대해 보고하고자 하였다.

인진(茵蔯) 추출물 및 유리지방산이 HepG2세포의 활성도에 미치는 영향은 MTT assay로 분석하였고 유리지방산으로 인한 HepG2세포의 지방 축적 정도 및 호전 정도는 Oil Red O염색법으로 확인하였다. 또한 지방증으로 인한 세포자멸사에 대한 인진(茵蔯) 추출물의 개선 효과를 확인하기 위해 PUMA의 mRNA 발현 양상은 Real-time PCR 법으로, Caspase-3, -9, Bax, Bcl-2, pJNK 및 PUMA의 단백질 발현 양상은Western blot법으로 분석하였다.

그 결과 유리지방산 과부하로 lipoapoptosis를 유도한HepG2 세포에서 인진(茵蔯) 처리 후 지방증 감소 및 세포자멸사의 억제 변화를 관찰하였으며 특히 lipoapoptosis와 밀접하게 관련되어 있는 전달경로 중 pJNK 의 하위단계인 PUMA에 미치는 영향을 관찰하여 지방간염에 대한 인진(茵蔯)의 활용 가능성을 확인할 수 있었다.

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