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Contents

LISTS OF ABBREVIATIONS 8

ABSTRACT 10

초록(Abstract in Korean) 12

1. Introduction 14

2. Materials and methods 17

2.1. Regents 17

2.2. Animal care and recovery of ovaries 17

2.3. Collection of immature oocytes 17

2.4. In vitro maturation of canine COCs 18

2.5. Denuded oocytes and assessment of nuclear maturation 18

2.6. Microinjection 19

2.7. Gene expression analysis of Wee1B-siRNA-injected oocytes 19

2.8. Experimental design 20

2.9. Statistical analysis 21

3. Results 22

3.1. Optimal duration of IVM 22

3.2. Effect of Wee1B-siRNA microinjection into cytoplasm 22

3.3. Assessment of maturation-related genes by qPCR 23

4. Discussion 24

5. References 32

List of Tables

Table 1. Real-time PCR primers for quantification of gene expression 27

Table 2. Effects of in vitro maturation time on nuclear development of canine oocytes 28

Table 3. Effects of Wee1B-siRNA injection time on nuclear development of canine oocytes 29

List of Figures

Figure 1. Stages of nuclear maturation of canine oocytes (stained with Hoechst 33342) 30

Figure 2. Relative expression of genes related to the mechanism in which Wee1B functions in mammalian oocytes 31

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