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Contents

ABSTRACT 8

I. INTRODUCTION 10

II. MATERIALS AND METHODS 12

1. Materials 12

2. Animals 12

3. Bilateral cavernous nerve crushing (BCNC) 13

4. Erectile function assessment 13

5. Cell isolation and culture 14

6. Immunofluorescence staining 15

7. Flow cytometry analysis 15

8. RPSMCs migration assay 16

9. Western blotting 16

10. Quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) 17

11. Data analysis 18

III. RESULTS 19

1. Erectile function assessment 19

2. Characterization of RPSMCs 20

3. Sildenafil inhibits TGF-b-stimulated RPSMCs migration 24

4. Differential expression of PDE 5A mRNA and protein in RPSMCs 27

IV. DISCUSSION 29

V. CONCLUSION 34

REFERENCES 35

ABSTRACT (Korean) 40

List of Figures

Fig. 1. Assessment of erectile function. Erectile function was assessed by... 19

Fig. 2. Matrigel-based sprouting cavernous smooth muscle rat cell culture system.... 21

Fig. 3. Characterization of cultured RPSMCs from the sham-operated control and... 22

Fig. 4. Characterization and expression of RPSMCs. The image shows the... 23

Fig. 5. Effects of sildenafil on TGF-β-induced migration of RPSMCs from the... 25

Fig. 6. Effects of sildenafil on PDE 5 mRNA and protein expression. RPSMCs... 28

초록보기

 실데나필 (Sildenafil)은 음경 발기에 필수적인 음경 해면체 평활근의 이환을 유도하여 성기능 회복에 도움이 되는 약제로 알려져 있다. 음경 발기능에 주요 역할을 하는 음경 해면체 평활근의 이동은 음경 해면체의 염증 반응 및 이에 따른 섬유화에 큰 작용을 할 것으로 사료된다. 이에 대한 연구를 위하여 8주령 수컷 Sprague Dawley rat의 음경 해면체 신경 손상 수술군과 대조 수술군을 시행하고, 2주후 음경 해면체를 체취하였다. 채취한 음경 해면체는 1차 Matrigel을 근간으로 한 세포 배양 후, 2차 D-valine이 포함된 배지를 이용한 2단계 세포 배양을 시행하였다. 2단계 세포 배양 후 배양 세포 중 평활근 세포의 배양 정도 및 섬유 세포의 오염 정도를 평가하기 위하여 α-SMA, PECAM-1, desmin, S100A4의 발현을 면역화학염색을 통하여 확인하였다. 배양된 음경 평활근 세포 이동에 실데나필 및 TGF-β가 미치는 영향을 확인하였고, 면역형광염색 (immunofluorescence staining, IFS), 흐름세포측정분석 (flow cytometry analysis, FCA) 및 포스포디에스테라제 (phosphodiesterase, PDE) 5A형 mRNA를 측정하였다. IFS에서는 α-SMA과 desmin은 양성 반응을, PECAM-1 및 S100A4은 음성 반응을 보였으며, FCA에서는 평활근 세포는 69.9-79.3%, 섬유모세포는 5.2%로 확인되었다. 음경 평활근 세포의 이동은 음경 해면체 손상군과 대조 수술군에서 TGF-β 처치시 증가하였고, 실데나필 처치시 이동의 감소를 확인하였다. PDE 5A mRNA는 실데나필 처치시 증가를 확인하였으며, 이러한 결과는 음경 해면체 신경 손상군보다 대조 수술군에서 두드러지게 나타났다. 이러한 결과는 음경 해면체 평활근 세포의 이동 및 PDE 5A mRNA의 증가가 음경 발기능과 연관성이 있음을 보여주는 결과이다. 또한 음경 해면체 신경 손상시 음경 해면체 평활근의 회복에 도움이 될 것으로 사료된다.

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