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표제지

목차

국문 초록 13

I. 서론 15

II. 재료 및 방법 17

1. 재료 17

1) 시료 17

2) 시약 18

3) 기기 19

2. 방법 19

1) 세포배양 19

2) Nitric Oxide (NO) 생성량 측정 19

3) 동물 및 사료 20

4) 대장염 유발 및 시료처리 20

5) 대장 조직 분리 21

6) 유전자 발현량 측정 21

7) 단백질 활성화 측정 23

8) 조직염색 및 관찰 24

3. 통계처리 24

III. 실험 결과 25

1. In vitro 실험 결과 25

1) NO 생성량 25

2) 유전자 발현량 27

3) 단백질 활성화 47

2. In vivo 실험 결과 61

1) 대장 조직 길이 61

2) 조직학적 분석 63

3) 유전자 발현량 65

4) 단백질 활성화 85

IV. 고찰 93

V. 결론 102

참고문헌 104

ABSTRACT 113

표목차

Table 1. The Amount and Composition of Hwanggeum-tang (HGT)... 17

Table 2. The Sequences of Primers 23

Table 3. Effect of HGT and GST on NO Level in RAW 264.7 cells 25

Table 4. Effect of HGT and GST on PTGS2 mRNA Expression Level... 27

Table 5. Effect of HGT and GST on NOS2 mRNA Expression Level... 29

Table 6. Effect of HGT and GST on IL1B mRNA Expression Level in... 31

Table 7. Effect of HGT and GST on IL6 mRNA Expression Level in... 33

Table 8. Effect of HGT and GST on TNFA mRNA Expression Level... 35

Table 9. Effect of HGT and GST on IL10 mRNA Expression Level in... 37

Table 10. Effect of HGT and GST on HPGD mRNA Expression Level... 39

Table 11. Effect of HGT and GST on NQO1 mRNA Expression Level... 41

Table 12. Effect of HGT and GST on HO1 mRNA Expression Level in... 43

Table 13. Effect of HGT and GST on NFE2L2 mRNA Expression... 45

Table 14. Effect of HGT and GST on COX-2 Protein Expression Level... 47

Table 15. Effect of HGT and GST on STAT3 protein phosphorylation... 49

Table 16. Effect of HGT and GST on ERK protein phosphorylation in... 51

Table 17. Effect of HGT and GST on JNK protein phosphorylation in... 53

Table 18. Effect of HGT and GST on P38 protein phosphorylation in... 55

Table 19. Effect of HGT and GST on HO-1 Protein Expression Level... 57

Table 20. Effect of HGT and GST on NRF2 Protein Expression Level... 59

Table 21. Effect of HGT and GST on Colon Length in DSS-induced... 61

Table 22. Effect of HGT and GST on PTGS2 mRNA Expression Level... 65

Table 23. Effect of HGT and GST on NOS2 mRNA Expression Level... 67

Table 24. Effect of HGT and GST on IL1B mRNA Expression Level... 69

Table 25. Effect of HGT and GST on IL6 mRNA Expression Level in... 71

Table 26. Effect of HGT and GST on TNFA mRNA Expression Level in... 73

Table 27. Effect of HGT and GST on IL10 mRNA Expression Level in... 75

Table 28. Effect of HGT and GST on HPGD mRNA Expression Level... 77

Table 29. Effect of HGT and GST on NQO1 mRNA Expression Level... 79

Table 30. Effect of HGT and GST on HO1 mRNA Expression Level in... 81

Table 31. Effect of HGT and GST on NFE2L2 mRNA Expression Level... 83

Table 32. Effect of HGT and GST on COX-2 Protein Expression Level... 85

Table 33. Effect of HGT and GST on STAT3 protein phosphorylation in... 87

Table 34. Effect of HGT and GST on HO-1 Protein Expression Level... 89

Table 35. Effect of HGT and GST on NRF2 Protein Expression Level... 91

그림목차

Fig. 1. Effect of HGT and GST on NO level in RAW 264.7... 26

Fig. 2. Effect of HGT and GST on PTGS2 mRNA expression... 28

Fig. 3. Effect of HGT and GST on NOS2 mRNA expression... 30

Fig. 4. Effect of HGT and GST on IL1B mRNA expression... 32

Fig. 5. Effect of HGT and GST on IL6 mRNA expression... 34

Fig. 6. Effect of HGT and GST on TNFA mRNA expression... 36

Fig. 7. Effect of HGT and GST on IL10 mRNA expression... 38

Fig. 8. Effect of HGT and GST on HPGD mRNA expression... 40

Fig. 9. Effect of HGT and GST on NQO1 mRNA expression... 42

Fig. 10. Effect of HGT and GST on HO1 mRNA expression... 44

Fig. 11. Effect of HGT and GST on NFE2L2 mRNA... 46

Fig. 12. Effect of HGT and GST on COX-2 protein expression... 48

Fig. 13. Effect of HGT and GST on STAT3 protein... 50

Fig. 14. Effect of HGT and GST on ERK protein... 52

Fig. 15. Effect of HGT and GST on JNK protein... 54

Fig. 16. Effect of HGT and GST on P38 protein... 56

Fig. 17. Effect of HGT and GST on HO-1 protein expression level... 58

Fig. 18. Effect of HGT and GST on NRF2 protein expression... 60

Fig. 19. Effect of HGT and GST on colon length in... 62

Fig. 20. Representative colon sections stained with hematoxylin... 64

Fig. 21. Effect of HGT and GST on PTGS2 mRNA expression... 66

Fig. 22. Effect of HGT and GST on NOS2 mRNA expression... 68

Fig. 23. Effect of HGT and GST on IL1B mRNA expression... 70

Fig. 24. Effect of HGT and GST on IL6 mRNA expression... 72

Fig. 25. Effect of HGT and GST on TNFA mRNA expression... 74

Fig. 26. Effect of HGT and GST on IL10 mRNA expression... 76

Fig. 27. Effect of HGT and GST on HPGD mRNA expression... 78

Fig. 28. Effect of HGT and GST on NQO1 mRNA expression... 80

Fig. 29. Effect of HGT and GST on HO1 mRNA expression... 82

Fig. 30. Effect of HGT and GST on NFE2L2 mRNA... 84

Fig. 31. Effect of HGT and GST on COX-2 protein expression... 86

Fig. 32. Effect of HGT and GST on STAT3 protein... 88

Fig. 33. Effect of HGT and GST on HO-1 protein expression... 90

Fig. 34. Effect of HGT and GST on NRF2 protein expression... 92

초록보기

목적 : 이 연구의 목적은 황금탕 (HGT)과 감초사심탕 (GST)이 염증성 장 질환에 미치는 효능을 조사하는 것이다.

방법 : C57BL / 6N 생쥐에 증류수와 3 % Dextran sulfate sodium (DSS)을 투여하여 실험적으로 궤양성 대장염을 유발하였다. 생쥐들은 각각 7개의 군으로 나뉘었다 : 정상군, 음성 대조군 (증류수 경구 투여), 양성 대조군 (설파살라진 30mg/kg/일), 4개의 실험군 (HGT 및 GST 각각 200, 400mg/kg/일). 실험은 In vitro, In vivo 2가지의 방법으로 진행되었으며, In vitro 실험에서는 세포들의 NO 생성량, 유전자 발현량, 단백질 활성화를 측정하였다. In vivo실험에서는 생쥐의 대장 길이 회복 정도, 점막 손상 정도에 대한 조직학적 분석, 생체의 유전자 발현량 및 단백질 활성화를 측정하였다.

결과 : In vitro 실험의 실험군 (HGT, GST)에서 NO 생성량의 감소, 유전자 발현량의 유의한 변화 (염증 관련 인자의 감소, 항염증 관련 인자의 증가, 항산화효소의 증가), 단백질 활성화의 유의한 변화 (염증 활성 효소의 감소, MAPK의 감소, 항산화효소의 증가)가 나타났다.

In vivo 실험의 실험군 (HGT, GST)에서 회복된 대장의 길이는 음성 대조군보다 길었으며, 실험군 (HGT, GST)의 대장 점막에서 점막 장벽이 회복되었을 확인할 수 있었다. 유전자 발현량의 유의한 변화가 일부 나타났으며 (염증 관련 인자의 감소, 항염증 관련 인자의 증가, 항산화효소의 증가), 단백질 활성화의 유의한 변화 (염증 활성 효소의 감소, 항산화효소의 증가)도 확인할 수 있었다.

In vitro 실험이 In vivo보다 더 효과적인 결과가 나타났으며, 실험군 내에서는 HGT가 GST보다 더 효과적인 결과를 보였다. 또한, HGT와 GST의 농도가 높을수록 실험 결과가 더욱 효과적으로 나타났다.

결론 : HGT와 GST는 DSS에 의한 염증성 장 질환에 대한 치료 효과가 있으며, 황금과 감초를 포함한 약재가 항염증 효과에 도움이 된다는 것을 알 수 있었다. 동일한 실험 조건에서는 HGT가 GST보다 더욱 효과적인 것으로 나타났다. 염증성 장 질환에는 황금탕이 감초사심탕에 비해 더 효과적임을 알 수 있었고, 염증성 장질환의 치료 프로토콜의 확장을 위해 HGT, GST의 추가적인 독성연구 및 임상연구가 지속되어야 할 것이다.

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