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표제지

국문 초록

목차

Ⅰ. 서론 8

Ⅱ. 실험방법 13

1. 시약 및 Antibody 13

2. Washed platelets 제조 13

3. Phosphatidylserin (PS) 노출 측정 14

4. Phospholipid transporters 14

5. 혈소판 내 ROS, mitochondria ROS 측정 14

6. 혈소판 내 Ca²⁺ level 측정 14

7. 혈소판 내 ATP 측정 15

8. 혈소판 내 capase-3 활성 측정 15

9. 혈소판 내 mitochondria membrane potential 측정 15

10. Prothrombinase assay를 이용한 혈액 응고 촉진 활성의 측정 15

11. 통계분석 16

Ⅲ. 실험결과 17

Ⅳ. 고찰 24

Ⅴ. 참고문헌 27

Abstract 34

Figure 1. 혈소판에서 PHMG-p로 인한 PS노출. (A)혈소판을 PHMG-p로 1시간 배양한 후 PS 노출을 측정하였다. (B) PMHG-p(2.5... 20

Figure 2. PHMG-p에 의해 유도된 산화 스트레스 (A)CM-H₂DCF-DA가 load된 혈소판을 PHMG-p와 함께 1시간 동안 배양한 후... 21

Figure 3. PHMG-p의 세포내 매커니즘 (A)PHMG-p에 노출된 혈소판을 TMRE로 배양하고 flow cytometery에서 분석했다.... 22

Figure 4. PHMG-p의 응고촉진 효과 (A)혈소판을 PHMG-p로 1시간 동안 배양한 후 thrombin 생성을 측정하였다. (B)... 23

초록보기

 Polyhexamethylene guanidine phosphate(PHMG-p)는 구아디닌 계열의 가습기 살균제(HD)를 비롯한 산업용 및 가정용 제품에 널리 사용되는 일반적인 살생물 살균제이다. PHMG-p는 미국 식품의약청(FDA)으로부터 의료기기용 소독제로 승인을 받았으며, 일본, 호주, 중국 등 여러 국가에서 소독제로 등록 및 판매되고 있다. PHMG-p가 HD 관련 건강 문제의 원인으로 확인되었지만 잠재적인 메커니즘은 명확하지 않다. 여기에서 PHMG-p에 의한 혈소판의 응고 촉진 활성을 조사하고 기본 메커니즘을 명확히 했다.

분리된 혈소판에 PHMG-p를 노출 시 농도와 시간에 따라 응고 촉진 활성이 일어난다는 것을 확인하였다. 이는 세포 내막에 있는 PS가 세포 외막으로 노출되어 thrombin 생성이 증가하였고 이로 인해 혈소판의 응고 촉진 활성이 일어났다는 것을 나타낸다. PHMG-p는 막 인지질 비대칭을 유지하는 Scarmblase 활성화 및 Flippase 억제의 변화를 통한 Phosphatidylserin (PS) 노출을 유도하였다. 세포 내 칼슘 증가, caspase-3 활성화 및 ATP 고갈은 산화 스트레스 및 미토콘드리아 기능 장애에 의해 매개되는 PHMG-p에 의한 인지질 수송체 조절 장애의 기초가 되는 것으로 나타났다. PHMG-p에 노출된 혈소판은 thrombin 생성 증가로 나타난 바와 같이 응고 촉진 활성을 나타냈다. PHMG-p에 의한 PS 노출과 thrombin 생성의 억제가 항산화 효소 catalase 및 칼슘 chelator EGTA에 의해 산화스트레스 및 세포내 칼슘 증가의 역할이 확인되었다. 또한 ROS 생성이 미토콘드리아 기능장애를 유발하며 이로 인해 세포 외막으로 PS 노출이 일어나며 thrombin 생성이 유도된다. 과도한 혈소판의 활성화는 과도한 혈전 생성을 유도하여 심장마비, 심근경색, 뇌졸중 등과 같은 심혈관계 질환을 유발한다. 종합적으로, PHMG-p는 혈전증 위험과 심혈관 질환을 촉진할 수 있는 혈소판의 응고 촉진 활성화를 유발한다.

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