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Title Page 1

Contents 4

ABSTRACT 8

1. Introduction 10

2. Material and Methods 14

2.1. Reagents 14

2.2. Cell culture 14

2.2.1. Cell viability and Nitric Oxide (NO) assay 14

2.3. Animals and Treatment 15

2.3.1. Y-maze test 16

2.3.2. Morris water maze test 16

2.4. Total RNA isolation, Reverse-transcription PCR 17

2.5. Western blot 18

2.6. Immunofluorescence 19

2.7. Statistical analysis 19

3. Results 21

3.1. Effects of NO production by Peptidomimetics in LPS-stimulated BV-2 cells 21

3.2. Inhibition of iNOS, COX-2 production by NIP001 in LPS-stimulated BV-2 cells 24

3.3. Inhibition Effects of pro-inflammatory cytokines by NIP001 in LPS-stimulated BV-2 cells 26

3.4. Inhibition Effects of MAPK pathway phosphorylation by NIP001 in LPS-stimulated BV-2 cells 27

3.5. Inhibitory Effect of NIP001 on Degradation of IĸBα and nuclear translation of NF-ĸB in LPS- stimulated BV-2 cells 29

3.6. Attenuation of Cognitive and Behavioral Disorders in a Scopolamine-Induced Amnesia Mouse Model by NIP001 32

3.7. Inhibition of iNOS production by NIP001 in Mouse Hippocampus 35

3.8. NIP001 promoted the protein expression of CREB/BDNF in the Mouse Hippocampus 36

4. Discussion 38

References 42

Abstract (in Korean) 46

List of Tables 6

Table 1. PCR primer sequence 17

Table 2. Antibodies used in Western blot 18

List of Figures 7

Figure 1. The effects of peptidomimetics on cell viability and NO production in LPS-... 22

Figure 2. The effects of dose-dependent peptidomimetics on cell viability and NO... 23

Figure 3. Structures of NIP001 and NIP003 23

Figure 4. The effects of NIP001 on iNOS and COX2 expression in LPS-induced BV-... 25

Figure 5. The effects of NIP001 on pro-inflammatory Cytokines expression in LPS-... 26

Figure 6. The effects of NIP001 on ERK, JNK and p38 phosphorylation in LPS-... 27

Figure 7. The effect of NIP001 on p65 nuclear factor (NF-ĸB) activation and IĸBα... 30

Figure 8. The effects of NIP001 on Cognitive and Memory Disorders in a... 34

Figure 9. The effects of NIP001 on iNOS expression in a scopolamine-induced... 35

Figure 10. The effects of NIP001 on CREB/BDNF expression in a scopolamine-... 36

초록보기

 최근 몇 년 동안 알츠하이머병(AD)과 관련된 경미한 인지 장애를 유발하는 미세아교세포 매개 신경염증에 관한 많은 연구가 진행되었다. 과도한 미세아교세포 매개 신경염증 반응은 기억 장애 및 인지 기능 장애에 중추적으로 관여하며 신경염증 관련 신경 퇴행 질환의 주요 원인이기도 하다. 펩타이드의 특이적인 구조적 변형 펩티도미메틱인 NIP001은 다양한 감염성 질환에 유익한 효과를 나타내는 chysophsin-1의 특이적인 서열을 이용하여 합성한 펩타이드 유사체이다. 이러한 NIP001의 기억장애와 신경염증에 대한 효과와 근본적인 분자기전은 아직 명확하지 않다. 본 연구에서는 LPS로 자극된 BV-2 미세아교세포와 스코폴라민으로 유도된 C57BL/6N 마우스 모델에 대한 NIP001의 항염증 효과를 확인하는 실험을 진행했다. NIP001 전처리는 LPS로 자극된 BV-2 미세아교세포에서 산화질소와 염증성 사이토카인의 생성 및 발현을 억제하는 것으로 나타났다. 또한, NIP001은 LPS에 의해 유도된 NF-κB의 활성화와 ERK 신호전달의 인산화를 현저히 억제하여 BV-2 미세아교세포에서 iNOS 및 COX-2와 같은 염증 매개체를 조절하는 것으로 나타났다. C57BL/6N 마우스에 9일간 NIP001을 5mg/kg 및 10mg/kg 복강 내 투여하고, 8일부터 2일간 스코폴라민을 2mg/kg 복강 내 투여했다. 연구 결과, 스코폴라민을 투여한 쥐는 Y-maze 및 Morris water maze 실험을 통해 기억 장애와 인지 기능 장애를 보였으며, 이러한 효과는 해마에서 신경 보호 신호 마커(BDNF 및 p-CREB)의 손실과 염증 반응(iNOS)의 증가를 동반하는 것으로 확인되었다. 또한, 새로운 펩티도미메틱인 NIP001은 스코폴라민으로 인한 인지 장애와 신경 염증을 예방했다. 이러한 결과는 NIP001이 신경염증과 관련된 경도인지장애의 약물이 될 수 있는 잠재력을 가지고 있음을 시사한다.

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