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서론=345,49,2

재료 및 방법=346,50,1

Microbial strain, plasmid, 배지 및 토양시료 수집.=346,50,1

토양 DNA 순수분리.=346,50,1

Metagenomic library 제작.=346,50,1

유용 유전자 탐색 및 염기서열 분석.=346,50,2

결과 및 고찰=347,51,1

Metagenomic library 제작 및 효율성 검정.=347,51,1

유용 clone 탐색.=347,51,2

색소생산 유전자의 염기서열.=348,52,1

Metagenomic HPPD유전자 비교분석.=348,52,1

Metagenomic HPPD유전자 기능분석.=348,52,3

초록=350,54,1

감사의 글=350,54,1

참고문헌=350,54,2

초록보기

난배양 미생물로부터 천연물질을 찾기 위하여 토양으로부터 직접분리 된 DNA와 cosmid vector를 이용하여 metagenomic library를 제작하고 탐색 하였다. 대장균에서 발현되는 유전자은행 초기 탐색 결과 LB배지에서 잘 자라면서 브라운 색깔을 내는 여러 개의 clone을 선발 하였다. 선발된 여러 후보 clone중 pYS85C는 돌연변이를 유도하였으며 색깔을 생산하지않는 clone 들에 대하여 염기서열을 결정 하였다. 돌연변이clone들로부터 결정된 pYS85C 염기서열 결과 아미노산이 393개이며 44.5 kDa으로 색소형성에 관여하는 4-hydroxyphenylpyruvic acid dioxygenase(HPPD) 유전자로 판명 되었다. 또한, BLAST비교 분석에서 이효소는 기존에 밝혀진 HPPD효소와 60% 정도의 identity를 보였고 C-말단에서는 많은 conserved domain이 있었다. 이러한 결과로 볼 때 천연물질을 합성 할 수 있는 유전자는 토양DNA로부터 직접 분리되어 발현될 수 있으며 이러한 기술은 새로운 물질을 찾는데 중요한 tool이 될 수 있다.

To access the natural products of uncultured microorganisms, we constructed and screened the metagenomic DNA libraries by using a cosmid vector and DNA inserts isolated directly from soil. Initial screening of the libraries in Escherichia coli resulted in the isolation of several clones that produce a dark brown color when grown in LB medium. One of the positive clones, designed pYS85C, was transposon mutagenized and the DNA surrounding the transposon insertions in cosmids that no longer conferred the production of brown pigment to E. coli was sequenced. Annotation of the pYS85C sequence obtained from the transposon mutagenesis experiment indicated a single 393 amino acid open reading frame (ORF) with a molecular mass of about 44.5 kDa, predicted to be a 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenases (HPPDs), was responsible for the observed brown pigment. In a BLAST search against deposited sequence, the translated protein from this ORF showed moderate-level identity (>60%) to the other known HPPDs and was most conserved in the C-terminal region of the protein. These results show that genes involved in natural product synthesis can be cloned directly from soil DNA and expressed in a heterologous host, supporting the idea that this technology has the potential to provide novel natural products from the wealth of environmental microbial diversity and is a potentially important new tool for drug discovery.

권호기사

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기사명 저자명 페이지 원문 목차
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Pseudomonas sp. JH1014의 섬유소분해 활성 특성 허희연 ;정유진 ;신은선 ;권은주 ;김유정 ;김정호 ;김 훈 pp.322-325

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인공 DNase의 리간드 화합물로써 2.9-(N,N-dimethylethylenediaminomethyl)-1,10-phenanthroline 분자내 수소결합들의 역할 성낙도 ;박경용 pp.326-330

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다섯 가지 DNA 추출방법에 의한 옥수수 원료 및 가공시료의 DNA 추출 효율의 비교 이훈희 ;송희성 ;김재환 ;이우영 ;이순호 ;박선희 ;박혜경 ;김해영 pp.331-334

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국내에서 개발된 GM 쌀(밀양 204호, 익산 483호)에 대한 정성 PCR 분석법 개발 김재환 ;송희성 ;지상미 ;류태훈 ;김동헌 ;김해영 pp.335-338

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DEB 처리에 의해 유도된 벼 돌연변이 집단으로부터 도열병 감수성 돌연변이 분리 김혜경 ;이상규 ;한무호 ;전용희 ;이기환 ;이윤형 ;부성희 ;한태룡 ;전종성 pp.339-344

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토양의 DNA로부터 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase 유전자 탐색 및 분리 윤상순 ;이정한 ;김수진 ;김삼선 ;박인철 ;이미혜 ;구본성 ;윤상홍 ;여윤수 pp.345-351

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석류 phytoestrogen 성분의 추출특성 분석 김성호 ;김인호 ;강복희 ;차태양 ;이진형 ;김종명 ;임순옥 ;송경식 ;송방호 ; pp.352-357

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거대배아미 식이가 streptozotocin 유도 당뇨 흰쥐의 혈장과 간 조직 중 지질과산화물 농도와 항산화 효소 활성에 미치는 효과 이연리 ;강미영 ;남석현 pp.358-363

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Trichoderma harzianum 유래 β-mannanase에 의한 locust bean gum 가수분해 올리고당의 동정 및 Bifidobacterium spp.에 대한 생육활성 김유진 ;박귀근 pp.364-369

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천마 분획물이 고지방식이를 급여한 흰쥐의 혈청 지질농도에 미치는 영향 홍희도 ;김영찬 ;금인경 ;김성수 ;김경임 ;한찬규 pp.370-374

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참고문헌 (26건) : 자료제공( 네이버학술정보 )

참고문헌 목록에 대한 테이블로 번호, 참고문헌, 국회도서관 소장유무로 구성되어 있습니다.
번호 참고문헌 국회도서관 소장유무
1 (1998) Prokaryotes: The unseen majority. , 미소장
2 (1997) Recombinant approaches for accessingbiodiversity, 미소장
3 (1997) A molecular view of microbial diversity andthe biosphere, 미소장
4 (1995) In Fifty years ofantimicrobials: past perspectives and future trend., CambridgeUniversity Press 미소장
5 (1998) Molecular biological access to thechemistry of unknown soil microbes: a new frontier for naturalproducts, 미소장
6 (1997) Characterization of a DNA polymerase from theuncultivated psychrophilic archaeon Cenarchaeum symbiosum, 미소장
7 (1998) Phylogenomics: improving functionalpredictions for uncharacterized genes by evolutionary analysis, 미소장
8 Cloning the soil metagenome: a strategy for accessing the genetic and functional diversity of uncultured microorganisms. 네이버 미소장
9 (2002) Cloning the metagenome: cultureindependentaccess to the diversity and functions of theuncultivated microbial world, 미소장
10 (2000) Novel natural products from soil DNAlibraries in a streptomycete host, 미소장
11 (2001) Cloning and heterologous expression of a natural productbiosynthetic gene cluster from eDNA, 미소장
12 (2002) Isolation of antibiotics turbomycinA and B from a metagenomic library of soil microbial DNA, 미소장
13 (2000) Screening of environmental DNA librariesfor the presence of genes conferring lipolytic activity onEscherichia coli, 미소장
14 (1995) Direct isolation offunctional genes encoding cellulases from the microbialconsortia in a thermophilic, anaerobic digester maintained onlignocellulose, 미소장
15 (2002) A novel, high performance enzyme for starchliquefaction Discovery and optimization of a low-pH, thermostable alpha-amylase, 미소장
16 (1999) Chitinases from uncultured microorganisms, 미소장
17 (2003) Interaction of (4-hydroxyphenyl)pyruvate dioxygenase with the specific inhibitor2-[2-nitro-4--(trifluoromethyl)benzoyl]-1,3-cyclohexanedione, 미소장
18 (2005) 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase, 미소장
19 (1995) Geneticdissection of carotenoid synthesis in Arabidopsis definesplastoquinone as an essential component of phytoenedesaturation, 미소장
20 (1996) DNA recoveryfrom soils of diverse composition, 미소장
21 (2001) Astrategy for optimizing quality and quantity of DNA extractedfrom soil, 미소장
22 (1992) Cloning and stablemaitenance of 300-kilobase-pair fragments of human DNA inEscherichia coli using an F-factor-based vector, 미소장
23 (2002) New naturalproduct families from an environmental DNA(eDNA) genecluster, 미소장
24 (2004) Evaluation of DNA recovery fromsoil and sediment samples, 미소장
25 (2001) Expression and isolation of antimicrobial small molecules fromsoil DNA libraries, 미소장
26 (1994) A Streptomyces avermitilis gene encoding a 4-hydroxyphenylpyruvicacid dioxygenase-like protein that directs theproduction of homogentisic acid and an ochronotic pigment inEscherichia coli, 미소장