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B. subtilis MJP1이 생산하는 항균물질을 분리·정제하기

위하여 SPE, IEC, GFC를 통한 정제를 수행하였다. 정제된

항세균 물질은 tricine SDS-PAGE에서 하나의 band임을 확

인 한 후 N-말단 아미노산 서열분석을 하였으나 N-말단이

blocking 되어 그 서열을 분석할 수 없었다. 이에 그 내부서

열을 알아보기 위한 LC를 이용한 ESI-MS/MS를 시행하였

으나 내부서열도 확인할 수 없었고, UPLC를 이용한 ESIMS

ESIMS/

MS를 시행한 결과 항세균 활성 물질은 분자량이 매우

유사한 2개의 peptide(3356.54 Da, 3400.5244 Da)가 존재

함을 확인하였다.

정제된 항세균 물질의 항균 spectrum을 조사한 결과, L.

monocytogenes에 가장 강한 항균활성을 나타내며 이외에 B.

subtilis, S. aureus subsp. aureus, E. faecalis 등의 Gram

양성균에서 항균활성을 나타내었다. 정제된 B. subtilis 항세

균 물질은 pH 3.0부터 pH 9.0 범위에서는 안정하였으며

4oC, 30oC, 50oC에서 24시간, 100oC에서 5분 동안 매우 안

정하였고, 70oC에서 24 시간, 100oC에서 30분 동안 처리한

구간부터 역가가 감소하여 121oC에서 15분 동안 처리한 구

간에서는 역가가 완전히 소실되었다. 효소 안정성 실험에서

정제된 항세균 물질은 일부 단백분해효소에 의해 분해되어

역가를 상실하였으며, lipase나 α-amylase에서는 안정함을 나

타냈다. 이로부터 정제된 항세균 물질이 넓은 pH 범위에서

안정하고, 비교적 높은 온도에서도 활성을 유지한다는 점을

관찰할 수 있었으며, 단백분해효소에 의해 분해되므로

bacteriocin임을 확인하였다.

본 연구를 통하여 B. subtilis MJP1으로부터 분리·정제

된 bacteriocin은 class IIa군의 특성과 유사하며, B. subtilis

MJP1은 본 분리 bacteriocin 이외에도 다른 항세균 물질과

항진균 물질을 생산하는 균주임을 알 수 있었다.

Antibacterial compound from Bacillus subtilis MJP1 was purified using C18

Sep-Pak cartridge, ion exchange chromatography, and gel filtration chromatography. The purified antibacterial

compound showed antibacterial activity against Listeria monocytogenes, Bacillus subtilis, Staphylococcus

aureus subsp. aureus, and Enterococcus faecalis. The purified antibacterial compound was found to be stable

at 100oC for 5 min and in the pH range of 3.0~9.0, but it was unstable at pH 10.0. It was inactivated by proteinase

K and pronase E, and heat treatment at 121oC for 15 min, but it was stable with lipase and α-amylase

treatment, which indicated its proteineous nature. Ultra performance liquid chromatography and electrospray

ionization tandem mass spectrometry analysis were used to identify the purified antibacterial compound and

confirmed the existence of two peptides (3356.54 Da, 3400.5244 Da).

권호기사

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기사명 저자명 페이지 원문 목차
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효모내로의 Xylose 운반 기작 한지혜 ;최기욱 ;정봉우 ;민지호 pp.7-12

동물병원성 뇌수막염 유발 곰팡이 Cryptococcus neoformans의 Pathogenomic Signaling Network 연구와 항곰팡이제 개발 고영준 ;권유원 ;나한나 ;반용선 pp.13-18

해양 생물 유래의 항균 펩타이드 및 작용 기작 황보미 ;이준영 ;이동건 pp.19-23

항산화물질을 생산하는 해양방선균 Streptomyces sp. ACT-18의 동정 및 Electron Spin Resonance Spectrometry를 이용한 항산화활성 김만철 ;김주상 ;Ramasamy Harikrishnan ;한용재 ;허문수 pp.24-31

천연물을 이용한 항균성 염료의 개발 유영은 ;박은영 ;정대화 ;변성희 ;김상찬 ;박성민 pp.32-39

Pichia pastoris에서 Zobellia galactanivorans 유래 재조합 β-Agarase의 고효율 분비생산 석지환 ;박희균 ;이상현 ;남수완 ;전숭종 ;김종현 ;김연희 pp.40-45

찹쌀의 종류와 전처리를 달리한 약주의 특성 및 휘발성 향기 성분 권영희 ;조성진 ;김재호 ;안병학 pp.46-52

집먼지 진드기 항원으로 아토피 피부염을 유발한 NC/Nga 생쥐에 미치는 γ-PGA의 효과 장순남 ;김금란 ;윤미영 ;강상모 pp.53-63

프로폴리스의 단백질합성저해활성 및 항진균활성 고아라 ;최갑성 ;최상기 pp.64-69

장환형 단일가닥 DNA를 이용한 암세포 성장 억제 유전자 발굴 배윤위 ;문익재 ;서영배 ;도경오 pp.70-76

항생제 다제내성 Pseudomonas aeruginosa 및 Candida균주에 대한 산사자의 항균 활성 류희영 ;안선미 ;김종식 ;정인창 ;손호용 pp.77-83

Bacillus subtilis MJP1이 생산하는 항세균 물질의 분리·정제 및 특성규명 임은정 ;양은주 ;장해춘 pp.84-92

프랑킨센스 에센셜 오일 흡입이 OVA로 유도된 알러지성 천식 모델 생쥐에 미치는 영향 이혜연 ;김금란 ;강상모 pp.93-104

소목 추출물의 항균활성과 Brazilin의 구조분석 권현정 ;김용현 ;남궁우 ;김선기 ;방인석 ;한만덕 pp.105-111

여뀌 추출물의 항균 활성과 화장품소재로서의 응용 김정은 ;김은희 ;박수남 pp.112-115

참고문헌 (28건) : 자료제공( 네이버학술정보 )

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번호 참고문헌 국회도서관 소장유무
1 Subtilosin A, a new antibiotic peptide produced by Bacillus subtilis 168: Isolation, structural analysis, and biogenesis. 네이버 미소장
2 Characterization of a bacteriocin produced by a newly isolated Bacillus sp. Strain 8 A. 네이버 미소장
3 Bradford, M. M. 1976. A rapid and sensitive method quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72: 248-254. 미소장
4 Cherif, A., H. Ouzari, D. Daffonchio, H. Cherif, K. Ben Slama, A. Hassen, S. Jaoua, and A. Boudabous. 2001. Thuricin 7: a novel bacteriocin produced by Bacillus thuringiensis BMG1.7, a new strain isolated from soil. Lett. Appl. Microbiol. 32: 243-247. 미소장
5 Detection and characterization of the novel bacteriocin entomocin 9, and safety evaluation of its producer, Bacillus thuringiensis ssp. entomocidus HD9. 네이버 미소장
6 Antimicrobial substances from lactic acid bacteria for use as food preservatives 네이버 미소장
7 Delves-Broughton, J. 1990. Nisin and its uses as a food preservative. Food Technol. 44: 100-117. 미소장
8 Removal of N-acetyl groups from blocked peptides with acylpeptide hydrolase. Stabilization of the enzyme and its application to protein sequencing. 네이버 미소장
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10 Bacteriocins of gram-positive bacteria. 네이버 미소장
11 Jansen, E. F. and D. J. Hirschmann. 1944. Subtilin-an antibacterial product of Bacillus subtilis: culturing conditions and properties. Arch. Biochem. 4: 297-309. 미소장
12 Influence of a dried Bacillus subtilis culture and antibiotics on performance and intestinal microflora in turkeys. 네이버 미소장
13 Sequence Analysis of Lantibiotics: Chemical Derivatization Procedures Allow a Fast Access to Complete Edman Degradation 네이버 미소장
14 [36] Automated edman degradation: The protein sequenator 네이버 미소장
15 Detection and characterization of cerein 7, a new bacteriocin produced by Bacillus cereus with a broad spectrum of activity 네이버 미소장
16 Purification and sequencing of cerein 7B, a novel bacteriocin produced by Bacillus cereus Bc7 네이버 미소장
17 Identification and partial characterization of tochicin, a bacteriocin produced by Bacillus thuringiensis subsp tochigiensis 네이버 미소장
18 Identification and characterization of the structural and transporter genes for, and the chemical and biological properties of, sublancin 168, a novel lantibiotic produced by Bacillus subtilis 168. 네이버 미소장
19 Piard, J. C. and M. Desmazeaud. 1992. Inhibiting factors produced by lactic acid bacteria. 2. Bacteriocins and other antimicrobial factors. Dairy. Sci. Tech. 72: 113-142. 미소장
20 Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa 네이버 미소장
21 Developments in the use of Bacillus species for industrial production. 네이버 미소장
22 Smith, B. J. 1994. Chemical cleavage of proteins. Methods Mol. Biol. 32: 297-309. 미소장
23 Tagg, J. R., A. S. Dajani, and L. W. Wannamarker. 1976. Bacteriocin of Gram-positive bacteria. Bacteriol. Rev. 40: 722-756. 미소장
24 Assay system for bacteriocins. 네이버 미소장
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27 Biotechnological studies in the Far-Eastern Region of Russia. 네이버 미소장
28 Genes of the sbo-alb locus of Bacillus subtilis are required for production of the antilisterial bacteriocin subtilosin. 네이버 미소장

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