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목차

표제지=0,1,1

제출문=0,2,1

요약문=1,3,5

SUMMARY(영문요약문)=6,8,2

CONTENTS(영문목차)=8,10,4

목차=12,14,4

제1장 연구개발과제의 개요=16,18,4

제2장 국내외 기술개발 현황=20,22,3

제3장 연구개발 수행내용 및 결과=23,25,1

제1절 연구내용 및 방법=23,25,1

1. Agaropectin sulfatase 생산균주의 분리 및 동정=23,25,1

가. 균주분리용 시료 및 배지=23,25,1

나. Sulfatase 생산 균주의 분리=23,25,1

다. Sphingomongs sp. AS6330의 동정=23,25,1

1) 형 태학적인 특성=23,25,2

2) 분리균의 지방산분석=24,26,1

3) DNA 증폭과 서열결정=24,26,1

4) 계통학적 분석=24,26,2

라. Agaropectin svlfatase 생산 발효조건=25,27,1

1) Agaropectin sulfatase 활성 의 측정=25,27,1

2) 합성기질을 이용한 효소활성=25,27,2

2. Agaropectin sulfatase의 정제와 특성 분석=26,28,1

가. 효소의 정제=26,28,1

나. 문자량 측정=26,28,2

다. 효소의 반응최적조건=27,29,1

다. 기질특이성=27,29,1

라. 효소의 반응속도=27,29,2

마. 기타 분석방법=28,30,1

1) 황산기 함량=28,30,1

2) EEO (Electroehdosmosis)=28,30,1

3) 겔 강도=28,30,1

4) 겔화 온도=28,30,2

5) 겔 융점=29,31,1

3. agaropectin sulfatase 대량생산=29,31,1

가. agaropectin sulfase 유전자의 과발현계 구축 및 형질전환=29,31,1

나. 발현 plasmid 구축=29,31,1

다. 구성적 과발현계 구축=30,32,1

라. Chaperone과 공발현=30,32,1

제2절 연구결과=31,33,1

1. Agaropectin sulfatase 생산균주의 분리 및 롱정=31,33,1

가. Sphingomonas sp. AS6330의 동정=31,33,1

1) 효소생산균의 분리=31,33,1

2) 형태학적 인 특성=31,33,1

3) 분리균의 지방산분석=31,33,2

4) DNA 증폭과 서 열결정=33,35,1

5) 계통분석=33,35,4

나. Agaropectin sulfatase 생산 배양조건=36,38,1

1) 최적 pH=36,38,1

2) 최적 온도=36,38,1

3) 최적 염농도=36,38,4

4) 최적 발효시간=39,41,6

2. Agaropectin sulfatase의 정제와 특성 분석=44,46,1

가. 효소의 정제=44,46,5

나. 분자량 측정=48,50,7

다. 효소의 반응최적조건=55,57,1

1) Agaropectin sulfatase의 pH 의존성=55,57,1

2) Agaropectin sulfatase의 온도 의 존성=55,57,4

라. 동력학적 상수=58,60,1

마. 저해제의 영향=58,60,3

바. 기질 특이성=61,63,1

사. Agaropectin sulfatase로 제조된 agarose의 물리화학적 특성=61,63,6

3. Agaropectin sulfatase 유전자의 cloning 및 유도성／구성적 과발현계 구축=67,69,1

가. 유도성 과발현계 구축=67,69,1

1) agaropectin sulfatase 유전자 증폭 및 subcloning=67,69,1

2) 발현 plasmid계 구축=67,69,2

나. 구성적 과발현계 구축=69,71,1

다. 재조합 대장균에서 agaropectin sulfatase의 과발현=70,72,1

1) 유도적 발현계=7O,72,3

2) 구성적 발현계=72,74,5

라. Chaperone과 공발현=76,78,1

마. 재조합 agaropectin sulfatase의 Zymogram 분석=76,78,4

제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도=80,82,1

제5장 연구개발결과의 활용계획=81,83,1

1. 환경성 개선효과=81,83,1

2. 경제성 개선효과=81,83,3

제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보=84,86,1

제7장 참고문헌=85,87,11

영문목차

[title page etc.]=0,1,2

SUMMARY(Korean)=1,3,7

CONTENTS(영문목차)=8,10,8

Chapter1. Introduction=16,18,4

Chapter2. Scientific backgrounds of tile research=20,22,3

Chapter3. Contents and results of the research=23,25,1

1. Contents and methods of the research=23,25,1

1) Isolation of agaropectin sulfatase producing bacterium=23,25,1

(1) Materials for isolation of bacterium=23,25,1

(2) Isolation of agaropectin sulfatase producing bacterium=23,25,1

(3) Identification of isolated Sphingomonas sp. AS6330=23,25,1

① Characterization of phynotype of isolate=23,25,2

② Analysis of fatty acid from isolate=24,26,1

③ DNA amplification and sequencing of 165 rDNA=24,26,1

④ Phylogenetic analysis=24,26,2

(4) Fermentation conditions for the producing agaropectin sulfatase=25,27,1

① Determination of agaropectin sulfatase activity=25,27,1

② Determination of agaropectin sulfatase activity using synthetic svbstrate=25,27,2

2) Purification and characterization of agaropectin sulfatase=26,28,1

(1) Purification of agaropectin sulfatase=26,28,1

(2) Determination of molecular weight=26,28,2

(3) Determination of optimal reaction conditions=27,29,1

(4) Determination of substrate specificity=27,29,1

(5) Determination of kinetic parameters=27,29,2

(6) Other analytical methods=28,30,1

① Determination of sulfate contents=28,30,1

② Determination of EEO (Electroendosmosis)=28,30,1

③ Detenmiantion of gel strength=28,30,1

④ Determiantion of gelling temperature=28,30,2

⑤ Determiantion of meting temperature of gel=29,31,1

3) Overproduction of agaropectin sulfatase=29,31,1

(1) Overexpression system design and transformation=29,31,1

(2) Design of expression plasmid=29,31,1

(3) Design of constitutive overexpression system=30,32,1

(4) Co-expression with chaperone=30,32,1

2. Results of the research=31,33,1

1) Isolation of agaropectin sulfatase producing bacterium=31,33,1

(1) Identification of isolated Sphingomonas sp. AS6330=31,33,1

① Isolation of agaropectin sulfatase producing bacterium=31,33,1

② Characterization of phynotype of isolate=31,33,1

③ Analysis of fatty acid from isolate=31,33,2

④ DNA amplification and sequencing of 165 rDNA=33,35,1

⑤ Phylogenetic analysis=33,35,4

(2) Fermentation conditions for the producing agaropectin sulfatase=36,38,1

① Optimun pH=36,38,1

② Optimun temperature=36,38,1

③ Optimum salt concentration=36,38,4

④ Optimum fermentation time=39,41,6

2) Purification and characterizatioh of agaropectin sulfatase=44,46,1

(1) Puriscation of agaropectin sulfatase=44,46,5

(2) Determination of molecular weight=48,50,7

(3) Determination of optimal reaction conditions=55,57,1

① pH dependence of agaropectin sulfatase=55,57,1

② Temperature dependence of agaropectin sulfatase=55,57,4

(4) Determination of kinetic parameters=58,60,1

(5) Effects of inhibitors=58,60,3

(6) Determination of substrate specificity=61,63,1

(7) Physicochemical properties of agarose prepared with agaropectin sulfatase=61,63,6

3) Cloning of agaropectin sulfatase and design of expression plasmids=67,69,1

(1) Design of inducible expression Plasmid=67,69,1

① PCR of agaropectin sulfatase and subcloning=67,69,1

② Design of expression plasmid=67,69,2

(2) Design of constitutive expression=69,71,1

(3) Overexpression of agaropectin sulfatase in E. coli=70,72,1

① Inducible expression=70,72,3

② Constitutive expression=72,74,5

(4) Co-expression with chaperone=76,78,1

(5) Analysis of recombinant agaropectin sulfatase with Zymogram=76,78,4

Chapter4. Achievements and contribution of the research=80,82,1

Chapte 5. Application of the research=81,83,1

1. Environmental effects=81,83,1

2. Economic effects=81,83,3

Chapter6. International information obtained through the research=84,86,1

Chapter7. References=85,87,11

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