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목차

표제지=0,1,1

제출문=0,2,1

요약문=0,3,5

Summary=0,8,3

Contents=0,11,3

목차=0,14,3

제1장 연구 개발과제의 개요=1,17,4

제2장 국내외 기술개발 현황=5,21,1

제3장 연구개발수행 내용 및 결과=6,22,1

제1절 돼지증식성회장염균의 분리 및 동정=6,22,1

1. 서론=6,22,3

2. 재료 및 방법=9,25,1

가. 돼지증식성회장염균의 분리 및 배양=9,25,1

1) 분리재료=9,25,1

2) 조직배양=9,25,2

3) 장조직유제의 세포 감염=10,26,1

4) 감염 세포조직의 맹복적 계대배양=10,26,2

5) 감염 세포조직의 감염 여부 관찰=11,27,2

6) 면역조직화학염색=12,28,1

나. 돼지 증식성회장염의 재현성 실험=12,28,1

1) 실험동물=12,28,2

2) 조직배양된 돼지증식성회장균의 준비=13,29,1

3) 장조직유제추출균의 준비=13,29,2

4) 접종량의 결정=14,30,1

5) 접종=14,30,1

6) 임상증상의 평가기준설정=15,31,1

7) 분변에서의 균체검사=15,31,1

8) 혈청학적 검사=15,31,1

9) 간접형광항체법=16,32,1

10) 부검=16,32,1

11) 조직학적 검사=16,32,1

3. 결과=17,33,1

가. 국내에서 분리된 Lawsonia균의 분리 및 배양=17,33,1

(1) 균 분리에 사용된 재료=17,33,3

(2) Lawsonia균의 분리=19,35,1

(3) Lawsonia균의 유지배양=19,35,3

(4) 분리균주의 동정=21,37,2

나. 돼지 증식성 회장염의 재현=22,38,1

(1) 임상증상=22,38,2

(2) 분변내 Lawsonia 균 검출 및 혈중 항체가 검사=23,39,3

(3) 부검 소견=26,42,1

(4) 면역조직화학 염색 결과=26,42,3

다. 햄스터에서의 증식성 회장염 유도=28,44,3

라. 국내 돼지증식성회장염의 감염 분포상황=30,46,3

4. 고찰=33,49,2

제2절 유산균의 Salmonellar균 감염 방어능 비교=35,51,1

1. 서론=35,51,2

2. 재료 및 방법=37,53,1

가. 실험동물=37,53,1

나. 유산균 급여=37,53,1

다. 살모넬라 감염에 대한 유산균 급여 마우스의 방어효과=37,53,1

라. 비장세포 증식 시험=37,53,2

마. 탐식세포 활성화 시험=38,54,1

바. 장관내 분비형 IgA의 정량 분석=38,54,1

사. 면역화학적 검사=38,54,2

아. 통계학적 분석=39,55,1

3. 결과=40,56,1

가. 비피도박터 유산균의 살모넬라균 감염에 대한 방어효과=40,56,2

나. 비피도박터 유산균의 비장 T와 B세포 활성화 효과=41,57,2

다. 비피도박터 유산균의 탐식세포 활성화 효과=42,58,2

라. 비피도박터 유산균의 장내 분비형 IgA 중강 효과=44,60,2

4. 고찰=46,62,3

제3절 유산균을 이용한 돼지로타바이러스 VP8* 발현=49,65,1

1. 서론=49,65,3

2. 재료 및 방법=52,68,1

가. 세균의 종류 및 배양 배지=52,68,1

나. 플라스미드와 DNA 조작=52,68,2

다. 셔틀벡터 작제 pNZ123:SPO2/B-galactosidase=53,69,1

라. Lactobacillus와 Bifidobacterium에서 발현할 셔틀벡터에 VP8*의 크로닝=53,69,2

마. 전기영동과 Wester blot=54,70,2

3. 결과=56,72,1

가. Shuttle vector pNZ123:SPO2:beta-galactosidase의 제작=56,72,1

나. XL1-Blue 에서의 beta-galactosidase의 발현=56,72,1

다. Shuttle vector pBESAF2/VP8*의 발현=56,72,1

라. E. coli와 Bifidobacteria에서 VP8*의 발현=56,72,2

마. Shuttle vector pAT:pgsA/VP8*의 제작=57,73,1

바. E. coli와 Lactobacilus casei에서 VP8*의 발현=57,73,6

4. 고찰=63,79,2

제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도=65,81,1

제5장 연구개발결과의 활용계획=66,82,2

제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보=68,84,1

제7장 참고문헌=69,85,16

영문목차

[title page etc.]=0,1,10

Contents=0,11,6

I. Introduction of project=1,17,4

II. General consideration of ralated technology=5,21,1

III. Results of the research=6,22,1

A. Isolation and identification of Lawsonia intracellularis=6,22,1

1. Introduction=6,22,3

2. Materials and methods=9,25,1

2.1. Isolation and in vitro cultivation of L. intracellularis=9,25,1

2.1.1. Source material=9,25,1

2.1.2. Cell culture=9,25,2

2.1.3. Infection of cell culture with intestine mucosal homogenate=10,26,1

2.1.4. Blind passage of the infected cells=10,26,2

2.1.5. Monitoring of infection=11,27,2

2.1.6. Immunohistochemistry=12,28,1

2.2. Experimental induction of PE=12,28,1

2.2.1. Animals=12,28,2

2.2.2. Preparation of L. intracellulars pure culture inoculum=13,29,1

2.2.3. Preparation of intestinal mucosa homogenate inoculum=13,29,2

2.2.4. Quantificantion of inoculum=14,30,1

2.2.5. Inoculation=14,30,1

2.2.6. Clinical observation=15,31,1

2.2.7. Fecal shedding tests(PCR)=15,31,1

2.2.8. Serology testing=15,31,1

2.2.9. Indirect fluorescent antibody tests(1FAT)=16,32,1

2.2.10. Necropsy and evaluation of macroscopic lesions=16,32,1

2.2.11. Histologic tests=16,32,1

3. Results=17,33,1

3.1. In vitro cultivation and maintenance of L. intracellularis=17,33,1

3.1.1. Source material used in isolation of L. Intracellularis=17,33,3

3.1.2. Isolation of L. intracellularis=19,35,1

3.1.3. Cultivation and maintenance=19,35,3

3.1.4. Confirmation of the isolate=21,37,2

3.2. Experiment 1-Experment reporduction of PE=22,38,1

3.2.1. Clinical results=22,38,2

3.2.2. PCR and serum IgG titer=23,39,3

3.2.3. Macroscopic lesions=26,42,1

3.2.4. Immunohistochemistry staining=26,42,3

3.3. Experiment 2-Induction of PE in hamsters=28,44,3

3.4. Prevalence of PPE in Korea=30,46,3

4. Discussion=33,49,2

B. Comparison of prtective potentials between bifidobacterium longum and Lactobacillus casei against Salmonella Infection=35,51,1

1. Introduction=35,51,2

2. Materials and methods=37,53,1

2.1.1. Animals=37,53,1

2.1.2. Feeding procedure=37,53,1

2.1.3. Protective effect test against Salmonella infection in mice=37,53,1

2.1.4. Spleen cellproliferation assay=37,53,2

2.1.5. Macrophage activation assay=38,54,1

2.1.6. Determination of the level of sIgA from the intestinal contents=38,54,1

2.1.7. Immunohistochemistry=38,54,2

2.1.8. Statistical analysis=39,55,1

3. Results=40,56,1

3.1. Pretctive effect of B. longum against the salmonella infection=40,56,2

3.2. The effects of B. longum on the activiation of splenic T and B lymphocytes=41,57,2

3.3. The effects of B. longum on the macrophage activities=42,58,2

3.4. The effects of B. longum for sIgA levels in intestine=44,60,2

4. Discussion=46,62,3

C. Expression of procine retavirus VP3* in Lactobacillus casai and Bifidobacterium longum=49,65,1

1. Introduction=49,65,3

2. Materials and methods=52,68,1

2.1. Bacterial strain and culture media=52,68,1

2.2. Plasmid and DNA manipulation=52,68,2

2.3. Construction of shuttle vector pNZ123:SPO/B-galactosidase=53,69,1

2.4. Cloning of VP8* gene in L.casei and B.longum=53,69,2

2.5. Gel electrophoresis and Western blot analysis=54,70,2

3. Results=56,72,1

3.1. Construction of shuttle vector pNZ123:SPO/B-galactosidase=56,72,1

3.2. Expression of B-galactosidase in E.coli=56,72,1

3.3. Construction of shuttle vector pBESAF2/VP8*=56,72,1

3.4. Expression of shuttle vector pBESAF2/VP8*=56,72,2

3.5. Construction of shuttle vector pAT:psgA/VP8*=57,73,1

3.6. Expression of VP8* in E.coli and Lactobacillus casei=57,73,6

4. Discussion=63,79,22