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목차

[표제지 등]=0,1,2

제출문=1,3,1

핵심기술개발사업 보고서 초록=2,4,2

목차=4,6,4

표목차=8,10,1

그림목차=8,10,3

제1장 미소유체칩을 이용한 유전자 트랜스펙션=11,13,1

제1절 서론=11,13,1

1. 줄기세포=11,13,1

가. 배아 줄기세포와 성체 줄기세포=11,13,1

나. 성체 줄기세포 연구의 문제점=11,13,2

2. 미소유체칩을 이용한 유전자 트랜스펙션=12,14,1

제2절 기술개발 내용 및 방법=13,15,1

1. 줄기세포 특성을 갖는 인간 세포주 준비 및 배양조건 연구=13,15,1

2. 유전자 도입 방법 선정=14,16,1

가. 화학적 트랜스펙션 방법=14,16,2

나. 물리적 트랜스펙션 방법=16,18,1

3. 상용 Electroporation Apparatus를 이용한 사전 실험=16,18,1

4. 미소유체칩을 이용한 세포의 트랜스펙션 연구=16,18,1

가. DEP(Dielectrophoresis) 현상을 이용한 세포의 능동적 구동 및 정렬=17,19,1

나. 트랜스펙션 효율 조사를 위한 모델 시스템 확립=17,19,3

다. 트랜스펙션 효율과 세포 생존율을 동시에 만족시키는 최적 Electroporation 조건 확립=19,21,2

라. 모델 유전자를 이용하여 줄기세포 도입 후, 유전적 안정성 조사=20,22,1

마. 효율적인 Electroporation을 위한 칩 구조 연구=20,22,1

바. Electroporation 조건을 미소유체칩 상에서 검증 및 보완=21,23,1

제3절 결과 및 향후계획=21,23,1

1. 줄기세포 특성을 갖는 인간 세포주 준비 및 배양조건 연구=21,23,1

가. 줄기세포 선정 및 준비=21,23,1

나. 배지 조성 및 배양 조건의 확립=21,23,2

2. 유전자 도입 방법 선정=22,24,2

3. Electroporation Apparatus를 이용한 사전 실험=23,25,2

4. 미소유체칩을 이용한 세포의 트랜스펙션 연구=24,26,1

가. DEP 현상을 이용한 세포의 능동적 구동 및 정렬=24,26,4

나. PI를 이용한 유전자 트랜스펙션 효율 조사 시스템=27,29,3

다. 미소유체칩에서의 유전자 트랜스펙션=30,32,2

5. 결론 및 활용가능성=31,33,2

가. 성체줄기세포 수명 연장=32,34,1

나. 특이 표지단백질의 도입=32,34,2

다. 줄기세포를 이용한 유전자 치료=33,35,1

제4절 참고문헌=34,36,1

제2장 고속병렬 세포 이송 및 조작을 위한 능동형 구동 칩 연구=35,37,1

제1절 서론=35,37,1

제2절 기술개발 내용 및 방법=35,37,1

1. 동작 원리=35,37,2

2. 동작 Simulation=36,38,2

3. 칩의 설계=37,39,1

제3절 결과 및 향후계획=37,39,1

1. 제작 공정=37,39,2

2. 실험 결과=38,40,1

3. 결론=38,40,2

제4절 참고문헌=40,42,8

제3장 미소유체 칩 상에서 Quantum Dot 및 마이크로 비드를 이용한 생체물질 분석=48,50,1

제1절 서론=48,50,2

제2절 마이크로 비드 기반의 분석을 위한 미소유체 칩=49,51,1

1. 미소유체 칩의 구조 및 동작=49,51,2

2. 미소유체 칩 제작=50,52,2

제3절 Target 단백질의 검출=51,53,1

1. 마이크로 칩 및 비드의 준비=51,53,2

2. 단백질의 검출 과정=52,54,2

제4절 결과 및 고찰=53,55,2

제5절 결론=54,56,1

제6절 참고문헌=55,57,11

제4장 단일세포 수준의 세포 생산물 검출=66,68,1

제1절 서론=66,68,1

1. 단일 세포 생산물 검출=66,68,1

2. 미소유체칩을 이용한 세포 배양 및 세포 생산물 검출=67,69,1

가. PDMS를 이용한 High-Density 세포 Array 칩 개발=67,69,1

나. 생산 단백질의 검출=67,69,1

제2절 기술개발 내용 및 방법=68,70,1

1. 마이크로웰 Array 제작=68,70,2

2. 세포 선정 및 세포 배양=69,71,1

가. 사용 세포주=69,71,1

나. 배지 및 배양 조건=69,71,1

3. 마이크로웰 챔버 내로 수동형 세포 고정화=70,72,1

가. 마이크로웰 챔버 안에 Fibronectin의 선택적 흡착=70,72,1

나. 마이크로웰 챔버 내 세포 부착=71,73,1

4. 마이크로웰 챔버 내에서 생산된 단백질의 형광 검출=72,74,1

가. Capture 유리 슬라이드 제작=72,74,1

나. 생산 단백질 형광 검출=72,74,2

제3절 결과 및 향후계획=73,75,1

1. 마이크로웰 내에 선택적인 세포 부착=73,75,1

가. 선택적인 세포 부착=73,75,1

나. 단일 세포로 마이크로웰 챔버 내로 도입=73,75,2

다. 세포 배양=74,76,2

2. 생산된 단백질의 검출=75,77,1

가. 유리 슬라이드를 이용한 마이크로 웰 챔버의 고립=75,77,1

나. 단백질의 검출=75,77,2

3. CHO 세포의 항체 생산량 정량적 분석=76,78,1

가. 형광이미지 분석=76,78,1

나. 항체 생산량 정량적 계산=76,78,2

다. 여러 세포 주에 대한 비교=77,79,1

4. 결론 및 활용가능성=77,79,2

[제4절 참고문헌 등]=79,81,11

표목차

표1. 줄기 세포 배양을 위한 최적 배지 조성=22,24,1

표2. 줄기세포 Electroporation 조건=24,26,1

표3. PI를 이용한 Electroporation 조건=27,29,1

그림목차

그림1. 줄기 세포의 분화=12,14,1

그림2. 화학적 트랜스펙션 방법들=15,17,1

그림3. Absorption And Fluorescence Emission Profile Of PI Bound To dsDNA=18,20,1

그림4. Hydrolysis Of FDA By Acetyl Esterase Of Viable Cells=20,22,1

그림5. DEP를 통해 생성된 미소유체칩 내 Electric Field Gradient=24,26,1

그림6. DEP에 의해 세포가 미소유체칩 내 전극의 중앙에 정렬된 모습=25,27,1

그림7. Photograph Of Prototype Chip=26,28,1

그림8. Simulation Result Of Cell Positioning(제목없음)=26,28,1

그림9. DEP를 이용하여 정렬된 Cell의 이미지(Focus On Channel Bottom)=27,29,1

그림10. DEP를 이용하여 정렬된 Cell의 이미지(Focus On Channel Top)=27,29,1

그림11. FACS Analysis Of Negative Control=28,30,1

그림12. FACS Analysis Of EGFP Vector Electroporation=28,30,1

그림13. FACS Analysis Of PI Electroporation=29,31,1

그림14. Fluorescence Microscopy Image Of Microfluidic Electroporator Before Pulsation=30,32,1

그림15. Fluorescence Microscopy Image Of Microfluidic Electroporator After Pulsation=31,33,1

그림1. Schematics Of The Proposed Micro-Well Array Chip With Active DEP Control=41,43,1

그림2. Electric Field Simulation Around DEP Electrodes=42,44,1

그림3. Prototype Micro-Well Array Chip In A 2×2 Array=43,45,1

그림4. Fabrication Process=44,46,1

그림5. Fabricated Micro-Well Array Chip=45,47,1

그림6. Experimental Sequence Of Microbead Capture In Each Micro-Well=46,48,1

그림7. Capture Results Of Single Microbead Per Each Micro-Well=47,49,1

그림8. Microbeads Capture Results At Various Numbers=47,49,1

그림1. 미소유체 칩을 이용하여 단일 비드를 포획하는 개념도=60,62,1

그림2. 칩 제작 과정=61,63,1

그림3. 제작된 미소유체 칩의 전체 사진 및 확대된 현미경 사진=62,64,1

그림4. 실험 과정 및 각 단계에서 마이크로 챔버 내에 있는 비드의 상태=63,65,1

그림5. 실험 결과=64,66,1

그림6. 항체 농도에 대하여 측정된 형광의 밝기를 나타낸 그래프=65,67,1

그림1. PDMS 마이크로웰 Array 제작과정=80,82,1

그림2. 마이크로웰 챔버 내로 수동형 세포 고정화=81,83,1

그림3. 마이크로웰 챔버 내 세포 부착 및 생산된 단백질의 형광 검출=82,84,1

그림4. 마이크로웰 챔버 내 선택적 세포 부착=83,85,1

그림5. 생산 단백질의 형광 이미지=84,86,1

그림6. 생산 단백질의 형광 신호 세기 분포 히스토그램=85,87,1

그림7. 형광 신호의 Standard Curve=86,88,1

그림8. 생산 단백질의 마이크로웰 챔버 내 농도 분포 히스토그램=87,89,1

그림9. CS13* 클론들의 생산량 분포 비교=88,90,1

칼라목차

jpg

그림5. DEP를 통해 생성된 미소유체칩 내 Electric Field Gradient=24,26,1

그림2. Electric Field Simulation Around DEP Electrodes=42,44,1

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