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목차
[표제지]=0,1,1
제출문=1,2,2
보고서 초록=3,4,2
요약문=5,6,8
Summary(영문요약문)=13,14,6
Contents=19,20,4
목차=23,24,4
제1장 서론=27,28,4
제2장 국내ㆍ외 기술개발 현황=31,32,4
제3장 연구개발 수행 내용 및 결과=35,36,1
제1절 실험재료=35,36,1
1. 균주=35,36,1
2. 배지=35,36,1
3. Cell Lines 및 Media=35,36,2
4. Drugs=36,37,1
5. Oligonucleotide 합성 및 PCR(Polymerse Chain Reaction)=36,37,1
6. Reagents=36,37,1
7. 현미경=36,37,1
8. 제한효소=36,37,1
9. Filters=36,37,2
10. Sequencing=37,38,1
11. HTS(High Throughput Screening) System=37,38,1
12. Microplate Reader=37,38,1
13. DNA Chip=37,38,2
제2절 실험방법=39,40,1
1. 위암/간암 유전자 기능 연구를 위한 S. pombe 발현 연구=39,40,1
가. S. pombe Expression Vector의 Cateway 용 Destination Vector 제조=39,40,1
나. Human 유전자 cDNA의 S. pombe Expression Vector 클로닝=39,40,1
다. Human Gene의 S. pombe Overexpression=39,40,2
라. S. pombe Mutants를 이용한 항암제 민감성 관련 연구=40,41,2
2. Human 유전자의 암 관련성 검증=41,42,1
가. Cell Culture=41,42,1
나. Northern Blot 분석=41,42,1
다. RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)=41,42,2
라. Transfection=42,43,1
3. S. pombe의 Deletion Mutant를 이용한 대규모 약물 스크리닝=42,43,1
가. 384-well Liquid Assay=42,43,2
나. 384-well Plate Assay=43,44,1
다. 96-well Liquid Assay(IC50)(이미지참조)=43,44,2
라. 384 Robot Pinner를 이용한 약물 Plate Screen=44,45,1
4. S. Pombe의 Deletion Mutant를 이용한 약물의 표적 유전자 발굴=44,45,1
가. S. pombe merphology 변화와 Cell Staining=44,45,1
나. 다양한 Cancer Cell Line의 IC50 및 CI50조사=44,45,2
다. Flow Cytometry 분석=45,46,1
라. Apoptosis Assay=45,46,1
(1) Annexin V Assay=45,46,2
(2) Caspase 3 Assay=46,47,1
마. Xenograft Assay=46,47,1
바. 선도 물질의 화학 구조 유도체 합성=46,47,1
사. Human Microarray 분석=46,47,2
5. Tianscriptional silencing 조절하는 유전자 발굴 및 silencing 조절 약물 Screening=47,48,1
가. S. pombe Transformation=47,48,1
나. E. coli Transformation=47,48,2
다. Drug Screening 균주 제조 및 Silencing Assay=48,49,1
라. Genetic Screening 균주 제조 및 Liquid Assay=48,49,2
마. Functional Complementation=49,50,1
바. Drug Resistant Ts Mutant의 제조=49,50,2
제3절 결과 및 고찰=51,52,1
1. 위암/간암 유전자 기능 연구를 위한 S. pombe 발현 연구=51,52,1
가. 위암/간암 관련유전자의 고속 기능 검증 시스템 확립=51,52,1
나. Human gene의 S. pombe Overexpression 효과=51,52,2
다. S. pombe Mutants를 이용한 항암제 민감성 관련 연구=52,53,1
2. Human 유전자의 암관련성 검증=52,53,1
가. 유전자의 발현 연구=53,54,1
나. Northern blot 또는 RT-PCR에 의한 표적 유전자의 발현량 분석=53,54,1
다. Proliferation 분석=53,54,1
라. Foci Formation=53,54,2
3. S. pombe의 Deletion Mutant를 이용한 대규모 약물 스크리닝=54,55,1
가. 대규모 약물 스크리닝을 위한 Kit Strain의 선정=54,55,1
나. 대규모 약물 스크리닝=54,55,1
4. 후보 물질의 항암효과 연구=54,55,2
5. 후보 물질의 표적유전자 발굴=55,56,1
6. 후보 물질의 #4의 약물 작용기작 연구=55,56,1
7. 후보 물질의 KHG9의 작용 기작 연구=55,56,1
가. S. pombe Morphology 변화=55,56,1
나. S. pombe Mutant를 이용한 Target 조사=55,56,2
다. Apoptosis Assay=56,57,1
라. 다양한 Cancer Cell Line의 IC50 및 CI50조사(이미지참조)=56,57,1
마. Xenograft Assay=56,57,1
바. #9의 유도체 합성=56,57,1
사. Human Microarray 분석=56,57,2
8. 항암제 Cerulenin 작용 기작 연구=57,58,1
가. Cerulenin의 Cytotoxicity와 Adenine과의 관계=57,58,1
나. S. pombe Deletion Mutant를 이용한 Target 탐색=57,58,1
다. 세포 내 AMP/ATP 양의 비교=57,58,2
9. Transcriptional Silencing 조절 유전자 발굴 및 Genetic 스크리닝 시스템 확립=58,59,1
가. Heterochromatin 구조적 요인에 기인한 Transcriptional Silencing 조절 하는 스크리닝 시스템 개발을 위한 Strain 제조=58,59,1
나. S. pombe 돌연변이 균주와 Silencing Kit Strain을 이용한 Silencing 신규 조절 유전자 발굴=59,60,1
다. 발굴된 신규 돌연변이주와 분열효모 Library를 이용한 기능연구=59,60,1
10. NCI Library를 스크리닝을 통한 Chromatin 구조 및 Segregation 관련 항암 선도 물질을 발굴=59,60,1
가. Silencing과 관련된 Drug을 Screening 하기 위해서 관련 균주를 제조=59,60,2
11. 암관련 Human Gene을 타켓으로 하는 약물 발굴 시스템 확립=61,62,1
12. Database 구축=61,62,52
제4장 목표 달성도 및 대외기여도=113,114,6
제5장 연구개발 결과의 활용계획=119,120,1
제1절 타 연구에의 응용=119,120,2
제2절 사업화 및 기술이전=120,121,3
제6장 해외 과학기술 정보=123,124,1
제1절 Budding Yeast S. cerevisiae Deletion Mutant를 이용한 약물 스크리닝=123,124,2
제2절 S. cerevisiae에 Huamn Gene의 Overexpression에 의한 유전자 기능 연구 및 약물 스크리닝=124,125,2
제3절 S. pombe Deletion Mutant를 이용한 NCI Chemical Library 스크리닝을 통해 발굴된 KHG9의 작용기전 연구와 관련된 연구=125,126,2
제7장 참고문헌=127,128,3
영문목차
[title page etc.]=0,1,13
Summary=13,14,6
Contents=19,20,8
I. Introduction=27,28,8
II. Materials And Methods=35,36,1
1. Experimental Materials=35,36,1
(1) Strains=35,36,1
(2) Culture Media=35,36,1
(3) Cell Lines And Media=35,36,2
(4) Drugs=36,37,1
(5) Oligonucleotides And PCR=36,37,1
(6) Chemical Reagents=36,37,1
(7) Microscope=36,37,1
(8) Restriction Enzymes=36,37,1
(9) Filters=36,37,2
(10) Sequencing=37,38,1
(11) HTS(High Throughput Screening) System=37,38,1
(12) Microplate Reader=37,38,1
(13) DNA Chip=37,38,2
2. Experimental Procedures=39,40,1
(1) S. Pombe Expression Study For Functional Analysis Of The Human Genes Related To Gastric And Liver Cancer=39,40,1
① Construction Of Gateway Destination Vector For S. Pombe Expression Vector=39,40,1
② S. Pombe Expression Vector Cloning Of Human Gene cDNA=39,40,1
③ S. Pombe Overexpression Of Human Gene=39,40,2
④ Anticancer Drugs Sensitivity Using S. Pombe Mutants=40,41,2
(2) Validation Of Cancer Relation For Human Genes=41,42,1
① Cell Culture=41,42,1
② Northern Blotting=41,42,1
③ RT-PCR=41,42,2
④ Transfection=42,43,1
(3) Drug Screening Using S. Pombe Deletion Mutant=42,43,1
① 384-Well Liquid Assay=42,43,2
② 384-Well Plate Assay=43,44,1
③ 96-Well Liquid Assay(IC50)(이미지참조)=43,44,2
④ Drug Plate Screen Using 384 Robot Pinner=44,45,1
(4) Identification Of Drug Targets Using S. Pombe Deletion Mutant=44,45,1
① S. Pombe Morphology Change And Cell Staining=44,45,1
② IC50 Or GI50 Of Cancer Cell Line(이미지참조)=44,45,2
③ Flow Cytometry Analysis=45,46,1
④ Apoptosis Assay=45,46,1
ⓐ Annexin V Assay=45,46,2
ⓑ Caspase 3 Assay=46,47,1
⑤ Xenograft Assay=46,47,1
⑥ Structure Derivative Synthesis Of Leading Drugs=46,47,1
⑦ Human Microarray Analysis=46,47,2
(5) Screening Of Genes And Drugs Regulating Transcriptional Silencing=47,48,1
① S. Pombe Transformation=47,48,1
② E. Coli Transformation=47,48,2
③ Strain Construction For Drug Screening Or Silencing Assay=48,49,1
④ Strain Construction For Genetic Screening Or Liquid Assay=48,49,2
⑤ Functional Complementation=49,50,1
⑥ Construction Of Drug Resistant Ts Mutant=49,50,2
III. Results And Discussion=51,52,1
(1) S. Pombe Expression Study For Functional Analysis Of The Human Genes Related To Gastric And Liver Cancer=51,52,1
① Validation System Of Genes Function Related To Gastric And Liver Cancer=51,52,1
② S. Pombe Overexpression Effect Of Human Gene=51,52,2
③ Anticancer Drugs Sensitivity Using S. Pombe Mutants=52,53,1
(2) Validation Of Cancer Relation For Human Genes=52,53,1
① Expression Study Of Human Genes=53,54,1
② Expression Level Analysis Of Target Genes By Northern Blot Or RT-PCR=53,54,1
③ Proliferation Analysis=53,54,1
④ Foci Formation=53,54,2
(3) Drug Screening Using S. Pombe Deletion Mutant=54,55,1
① Kit Strain Selection For Drug Screening=54,55,1
② Drug Screening=54,55,1
(4) Anti-Cancer Effect Of Candidate Drugs=54,55,2
(5) Target Gene Validation Of Candidate Drugs=55,56,1
(6) Action Mechanism Study Of #4 Candidate Drug=55,56,1
(7) Action Mechanism Study Of KHG9 Candidate Drug=55,56,1
① S. Pombe Morphology Change=55,56,1
② Identification Of Drug Targets For S. Pombe Mutant=55,56,2
③ Apoptosis Assay=56,57,1
④ IC50 Or GI50 Of Cancer Cell Line(이미지참조)=56,57,1
⑤ Xenograft Assay=56,57,1
⑥ #9 Drug Derivative Synthesis=56,57,1
⑦ Human Microarray Analysis=56,57,2
(8) Action Mechanism Study Of Anticancer Drug, Cerulenin=57,58,1
① Relation Of Cytotoxicity And Adenine=57,58,1
② Identification Of Drug Targets For S. Pombe Mutant=57,58,1
③ Analysis Of AMP/ATP Level in vivo=57,58,2
(9) Transcriptional Silencing-regulating Gene Identification And Genetic Screening System=58,59,1
① Strain Construction For Silencing Assay=58,59,1
② New Silencing-regulating Gene Identification Using S. Pombe Mutant Strains And Silencing Kit Strain=59,60,1
③ Functional Study Using New Identified Strains And S. Pombe Library=59,60,1
(10) Validation Of Anti-cancer Leading Drug Related Chromatin Structure And Segregation Through NCI Library Screening=59,60,2
(11) Drug Validation System For Cancer-related Human Genes=61,62,1
(12) Database Construction=61,62,52
IV. Conclusion=113,114,14
V. References=127,128,3
jpg
Figure 17. Human Microarray Analysis=91,92,1
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