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SUMMARY

목차

CONTENTS 8

제1장 연구개발과제의 개요 16

제2장 국내외 기술개발 현황 19

제3장 연구 개발수행 내용 및 결과 24

제1절 세균 3종 혼합백신 농도별 효능 및 안전성 조사 24

1. 목적 24

2. 재료 및 방법 25

가. 백신 대상 균주 선정 25

나. 백신의 제조 및 접종 27

다. 백신의 혼합농도별 효능 조사 28

라. 백신의 혼합농도별 안전성 조사 28

3. 결과 및 고찰 29

가. 백신 대상 균주 선정 29

나. 백신의 혼합농도별 효능 조사 33

다. 혼합 불활성화 백신 투여에 따른 안전성 조사 36

제2절 Molecular adjuvant 첨가 3종 혼합백신 개발 38

1. 목적 38

2. 재료 및 방법 39

가. 넙치 면역 관련 유전자 클로닝 및 재조합 단백질 제작 39

나. Molecular adjuvant의 in vitro에서 활성 조건 및 in vivo에서 적정 투여 농도 조사 40

다. Molecular adjuvant 혼합백신의 효능 및 안전성 조사 40

3. 결과 및 고찰 41

가. 넙치 면역 관련 유전자 재조합 단백질 제작 및 정제 41

나. Molecular adjuvant의 in vitro에서 활성 조건 및 in vitro에서 적정 투여 농도 조사 43

다. Molecular adjuvant 혼합백신의 효능 및 안전성 조사 47

제3절 화합물 adjuvant 첨가 3종 혼합백신 개발 52

1. 목적 52

2. 재료 및 방법 53

가. 화합물 adjuvant 스크리닝 53

나. 화합물 adjuvant 첨가 혼합백신의 효능 및 안전성 조사 54

다. 화합물 adjuvant 첨가 혼합백신 현장 효능 및 안전성 조사 55

3. 결과 및 고찰 56

가. 화합물 adjuvant 스크리닝 56

나. 화합물 adjuvant 첨가 혼합백신의 효능 및 안전성 조사 58

다. 화합물 adjuvant 첨가 혼합백신 현장 효능 및 안전성 조사 64

제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 69

제5장 연구개발 결과의 활용계획 70

제6장 참고문헌 71

표목차

표 1. Multiplex PCR을 위한 primers 25

표 2. 연구에 사용된 균주 26

표 3. 주사백신의 혼합비율 27

표 4. Streptococcus parauberis 감염에 따른 누적폐사율 31

표 5. Streptococcus parauberis의 효소 활성 32

표 6. 백신 대상균주의 반수치사 농도(LD50)(이미지참조) 33

표 7. 백신 접종 후 넙치, Paralichthys olivaceus 인위감염에 따른 방어력 35

표 8. 백신 접종 후 넙치, Paralichthys olivaceus 라이소자임 활성 36

표 9. 넙치 혈액의 생화학적 성상(Glucose 농도) 36

표 10. Molecular adjuvant 백신 접종 후 넙치 혈액의 생화학적 성상 50

표 11. Adjuvant 스크리닝을 위한 실험 디자인 53

표 12. 화합물 adjuvant 효능 조사를 위한 실험 디자인 54

표 13. 인위감염 농도 55

표 14. 백신 처리 후 각 항원에 대한 응집항체가 59

표 15. 백신 접종 후 넙치, Paralichthys olivaceus 혈액의 생화학적 성상 62

표 16. 양식현장 넙치 백신 접종 후 혈액생화학적 성상 66

그림목차

그림 1. 노르웨이에서 수산용 백신 사용량 변화. 21

그림 2. 노르웨이의 주요 질병 발생 현황. 21

그림 3. 무지개송어 양식장에서 비브리오병 백신 사용 효과 사례 22

그림 4. Streptococcus parauberis로 16s rDNA 염기서열 30

그림 5. SDS PAGE 결과. 32

그림 6. Streptococcus parauberis의 용혈능 33

그림 7. 백신처리 후 Streptococcus iniae에 대한 응집항체가. 34

그림 8. 백신처리 후 Streptococcus parauberis에 대한 응집항체가. 34

그림 9. 백신처리 후 Edwardsiella tarda에 대한 응집항체가. 35

그림 10. 백신 처리 후 SOD 활성. 36

그림 11. 백신 처리 1주째 조직 검사. 38

그림 12. 재조합단백질 제작. 42

그림 13. Vector maps of pGEX 4T-1. 42

그림 14. E. coli BL21에서 pET22b.6H.MBP.G-CSF 발현 분석. 43

그림 15. Quantitative real-time PCR 분석 44

그림 16. pH별로 처리한 G-CSF 재조합 단백질이 넙치 백혈구의 IL-1β와 TNF 발현에 미치는 영향. 45

그림 17. 온도별로 처리한 G-CSF 재조합 단백질이 넙치 백혈구의 IL-1β 발현에 미치는 영향. 46

그림 18. G-CSF 재조합 단백질을 복강접종 후 넙치의 면역유전자(IL-1β와 TNF)의 발현량 비교. 47

그림 19. 백신 접종 후 응집항체가. 48

그림 20. 백신 처리 후 라이소자임 활성. 48

그림 21. 백신 접종 후 SOD활성. 49

그림 22. 백신 처리 4주째 인위감염 후 생존율 49

그림 23. 백신 처리 12주째 인위감염 후 생존율 50

그림 24. 백신 처리 3개월째 병리조직학적 검사. 52

그림 25. 백신 현장 적용 실험을 위한 백신 접종 모습(포항소재 넙치 양식장). 55

그림 26. Edwardsiella tarda FKC에 대한 응집항체가. 57

그림 27. 라이소자임 활성. 57

그림 28. 백신 처리 후 생체검사 및 병리조직학적 검사. 58

그림 29. 백신 처리 후 라이소자임 활성. 59

그림 30. 백신처리 후 SOD 활성. 60

그림 31. 인위감염 후 생존율 조사. 61

그림 32. 백신 처리 3개월째 병리조직학적 검사. 63

그림 33. 백신 접종 후 응집항체가. 64

그림 34. 백신 접종 후 라이소자임 활성. 64

그림 35. 백신 접종 후 SOD 활성. 65

그림 36. 백신 접종 4주, 8주 12주째 인위감염에 따른 누적폐사율. 66

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넙치, Paralichthys olivaceus 면역보강 세균3종 백신 연구 = (The)study of enhanced 3 species bacterial vaccine on olive flounder, Paralichthys olivaceus 이용현황 표 - 등록번호, 청구기호, 권별정보, 자료실, 이용여부로 구성 되어있습니다.
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