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목차
Abstract 11
I. 서론 12
1. 연구 배경 12
2. 연구 필요성 13
가. 기능성 소재 발굴을 위해 '생물의 자기방어물질' 활용 필요 13
나. 자생생물 자기방어물질 이용 면역조절 기능성 소재 발굴 필요 14
3. 연구 목표 15
II. 연구방법 16
1. 대상종 선정 16
2. 시료 확보 17
가. 자생식물 추출물 확보 17
나. 고염시료 및 해양생물 유래 균주 분리 및 배양액 추출물 확보 17
다. 돌기해삼 유래 추출불 확보 18
라. Lactobacillus plantarum 유래 항균펩타이드 확보 19
3. 항균 효능 분석 19
가. 병원균 둥 시료 확보 19
나. 항균활생 분석 19
다. 젖산함량 측정 20
4. 항염 효능 분석 20
가. 미세아교세포 이용 항염증 분석 20
나. 대식세포 이용 항염증 분석 21
5. 면역 증강 효능 분석 23
가. 대식세포(macrophage, RAW Blue) 배양 23
나. 항원(vaccine) 및 샘플(후보 면역증강 물질) 처리 23
다. 대식세포(RAW-Blue)이용 면역활성 측정 23
6. 오믹스(유전체, 전사체, 마이크로바이옴) 분석 24
가. 유전체 분석 24
나. 마이크로바이옴 분석 25
7. 통계 분석 26
III. 연구결과 27
1. 자생생물 유래 자기방어물질에 대한 유용성 분석결과 27
가. 자생식물 9종 추출물에 대한 면역조절(증강) 효능 결과 27
나. 돌기해삼 추출물에 대한 면역조절(증강/억제) 효능 결과 28
다. 극한 환정 서식 균주의 젖산 생산능 및 항균 효능 결과 33
2. 자기방어물질 발현 또는 작용 기작 정보 확보 결과 40
가. 항염효능 우수 백양꽃 유래 효능물질 탐색 결과 40
나. 항균효능 우수 유산균(Lactobacillis plantaum) 유래 항균펩타이드 유전자 확인 및 항균 활성 검증 44
3. 자생생물 유래 자기방어물질 대량 확보 방안 연구 54
가. 자기방어물질(젖산)의 고효율 생산을 위한 배양조건 결과 54
나. 자기방어물질 생산 최적화 유전자 정보 확보 56
IV. 고찰 및 결론 59
V. 참고 문헌 60
그림 1. 자생식물 9종의 70% 에탄올 추출물에 대한 면역증강 효능 분석 결과 28
그림 2. 단백질 분해효소(3종)가 처리된 돌기해삼 추출물에 대한 면역조절(증강/억제) 효능 결과 30
그림 3. Sep-Pak catridge 정제 돌기해삼 분획물에 대한 면역조절 효능 결과 32
그림 4. 고염 및 해양생물 유래 균주의 젖산 생성 확인 결과 33
그림 5. 젖산 과생산 분리 균주 및 고채배지 항균능 확인 균주를 이용한 액체 배지 내 항균활성 확인 결과 35
그림 6. 유산균 상둥액의 항균 활성 결과 36
그림 7. 유산균 상등액의 MIC 결과 36
그림 8. 균체량에 따른 항균 활성 결과 37
그림 9. 배양 온도 별 항균 활성 결과 38
그림 10. 열 안정성 평가 결과 38
그림 11. Poteinase K와 동시 처리에 따른 항균 활성 분석 결과 39
그림 12. 백양꽃 추출물 및 용매별 분획물 제작 40
그림 13. 백양꽃 유래 용매별 분획물의 면역억제 효능 결과 41
그림 14. 백양꽃 효능 우수 분획물의 LC MS/MS 분석 결과 42
그림 15. 백양꽃 유래 효능물질의 면역억제 효능 결과 43
그림 16. Pln 1 항균활성 분석 결과 45
그림 17. Pln 1 이웃 유전자 배열 46
그림 18. Pln 2 항균활성 분석 결과 47
그림 19. Pln 2 이웃 유전자 배열 47
그림 20. Pln 3의 상동성 비교 결과 48
그림 21. Pln 3의 항균활성 분석 결과 49
그림 22. Pln 3 이웃 유전자 배열 49
그림 23. Pln 4 항균활성 분석 결과 50
그림 24. Pln 4 이웃 유전자 배열 51
그림 25. Pln 5 항균활성 분석 결과 52
그림 26. 클로닝된 pln 5 항균활성 분석 결과 52
그림 27. Pln 5 이웃 유전자 배열 53
그림 28. 성장곡선에 따른 젖산 함량 및 항균활성 결과 55
그림 29. 분리 균주의 젖산 생산 비교 결과 56
그림 30. L-lactate dehydrogenase 상동성 비교 결과 57
그림 31. D-lactate dehydrogenase의 상동성 비교 결과 58
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