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목차
1. 연구개발과제의 개요 6
1. 연구개발 목적 6
2. 연구개발의 필요성 6
1) 사회문화적 중요성 6
2) 과학기술적 중요성 6
3) 경제산업적 중요성 9
3. 연구개발 범위 10
1) 항-글리칸 항체매개성 면역거부반응 기전 분석 10
2) 항-글리칸 혈액응고계 및 혈청보체 활성화 기전 분석 10
3) 항-글리칸 면역거부반응 제어기술 개발 및 검증 10
4) 글리칸 부적합 중소동물 장기이식 모델 개발 11
5) 항-글리칸 선천면역반응 조절 기술 개발 11
2. 연구수행내용 및 성과 12
1. 항-글리칸 항체매개성 면역거부반응 12
1) 글리칸 적중 마우스에서 항-글리칸 유도항체 생성 기전 분석 12
2) 마우스에서 항원 반응성 B-세포 활성화 분자 분석 17
2. 항-글리칸 응고 및 보체계 활성화 기전 연구 21
1) Microfluidics 시스템을 통한 in-vitro 활성화 검증 시스템 구축 21
2) Microfluidics 시스템을 통한 동종반응에서 응고계 및 보체계 활성화 기전 연구 21
3) Microfluidics 시스템에서 기개발 항체 효능 평가(항-C5, Integrin αIIbβ3, VCAM-1 항체) 26
4) 이종반응에서 내피세포 활성화에 의한 혈소판의 후속 활성화 분석 29
3. 항-글리칸 면역거부반응 제어기술 개발 및 검증 32
1) 기존 개발 항체 물리 화학적 특성 분석(항-C5, Integrin αIIbβ3, VCAM-1 항체) 32
2) 타겟 항원 특이적 B-세포 선택적 조절기술 개발 36
4. 글리칸 부적합 중동물 이식모델 개발 및 적용 48
1) 돼지-영장류 혈관 이식/재이식 모델에서 면역반응 분석 48
5. 이식 거부반응 억제를 위한 혈액형 항원 기반 이중기능 분자 개발(1세부 1위탁) 55
1) A(tri)-PAA-fluor 분자의 BCR 친화도 분석 55
2) 이중기능 분자 A-FTIC와 A-C6-FITC의 flow cytomety를 이용한 BCR 친화도 분석 56
3) Sandwich ELISA를 이용한 A-FTIC와 A-C6-FITC의 항원 친화도 분석 57
4) Anti-FITC CAR-T 세포의 제작 58
5) BCR 발현이 증가된 hybridoma 세포의 제작 59
6. 혈액형 항원 기반 올리고사카라이드 합성 및 기능화(1세부 2위탁) 60
1) Noeglycopetide 3 중간체 합성 60
2) Thioglycoside 4 중간체 합성 60
3) Iminate 5 중간체 합성 61
4) Trisaccharide 2 중간체 합성 61
5) Linker를 포함하는 trisaccharide 1 합성 62
6) 링커의 길이를 조절한 trisaccharide 1-6C, 1-12C 합성 62
7) 탄소 6개 및 12개 링커 합성 63
8) 링커의 길이를 탄소 6개, 12개로 확장된 trisaccharide 합성 및 형광물질 도입 63
7. 항글리칸 선천면역반응 조절 기술 개발(2세부) 64
1. 세포 준비 64
2. 돼지 내피세포에서 인간 CD200 또는 CD47 과발현의 인간 대 식세포 활성화 생체 외 억제능 평가 67
3. 인간 CD200 또는 CD47 과발현 돼지내피세포의 인간화 마우스 이식 후 인간 대식세포 활성화 및 이종내피세포 이식편 거부반응 외 억제능 평가 71
4. 인간 CD200, CD47, CD200/CD47 과발현 돼지 바이오인조혈관 제작 및 인간화 마우스 이종혈관이식모델 구축 75
5. 인간 CD200, CD47, CD200/CD47 과발현 돼지 바이오인조혈관의 인간 이종 세포성 및 체액성 면역반응 ex vivo 억제 효능 평가 77
6. Ex vivo system에서 효능을 보인 CD200 과발현 이종혈관의 인간화 마우스에서의 거부반응 조절 효능 평가 84
3. 목표 달성도 및 관련 분야 기여도 86
1. 목표 86
2. 목표 달성여부 86
3. 목표 미달성 시 원인(사유) 및 차후대책(후속연구의 필요성 등) 87
4. 연구개발성과의 활용 계획 등 88
붙임 : 참고문헌 89
별첨 : 주관연구기관의 자체평가 의견서[내용없음] 5
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