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목차

1. 연구개발과제의 개요 6

가. 연구개발 목적 6

나. 연구개발의 필요성 6

1) 인수공통감염병(Anthropozoonosis)이란? 6

2) 인수공통바이러스의 위험성 7

3) 현재 감염 진단 및 약물개발 방법의 한계점 7

4) 나노물질 기반 핵산 및 효소활성 분석 플랫폼의 장점과 가능성 7

다. 연구개발 범위 7

(1) 산화그래핀 기반의 바이러스 감염 진단 플랫폼 개발 7

(2) 산화그래핀 기반의 바이러스성 효소인 helicase와 RNA dependent RNA polymerase의 활성 분석 플랫폼 개발 및 약물 도출 8

2. 연구수행내용 및 성과 10

1. 1차년도 연구내용 10

가. 타겟 바이러스 감염진단을 위한 바이러스 유전정보 확보 10

나. 바이러스 감염 진단 지표 miRNA 선정 및 염기서열 설계 11

다. 바이러스 유전정보를 이용한 목표 바이러스성 효소 확보 11

(1) 목표 바이러스 유전정보 확보 및 효소 발현을 위한 유전자 재조합 11

(2) 바이러스 유래 효소 단백질 발현 및 정제 13

라. 목표 외 추가연구 성과 16

(1) 형광 단백질이 첨가된 바이러스 유래 재조합 단백질 확보 16

(2) 최적 효소 활성을 나타낼 수 있는 유전자 클로닝 및 재조합 단백질 확보 16

2. 2차년도 연구내용 18

가. 산화그래핀 기반의 바이러스 감염 진단 플랫폼 개발 18

(1) 바이러스 감염 진단 지표 프로브 제작 및 나노물질의 합성 18

(2) 바이러스 감염 진단 플랫폼 설계 및 시험관 내 검증 20

(3) 모델 바이러스를 이용한 세포내 바이러스 감염 진단 플랫폼 검증 22

나. 산화그래핀-형광 기반 바이러스성 효소활성 분석 플랫폼 개발 23

(1) 산화그래핀 기반 helicase 활성 분석 플랫폼 개발 및 최적화 23

(2) 산화그래핀 기반 RdRp 활성 분석 플랫폼 개발 및 최적화 27

3. 3차년도 연구내용 31

가. 세포수준에서의 바이러스 감염 진단을 위한 감염세포주 확보 31

나. 플라비바이러스 RdRp 활성 분석 플랫폼 구현 33

다. 개발된 helicase/RdRp 활성 분석법을 통한 저분자량 화합물 라이브러리 스크리닝 35

(1) 스크리닝을 위한 library 선정 35

(2) 개발된 helicase 활성 분석법을 통한 저분자량 화합물 라이브러리 스크리닝 36

(3) 개발된 RdRp 활성 분석법을 통한 저분자량 화합물 라이브러리 스크리닝 36

4. 4차년도 연구내용 37

가. 세포수준에서의 바이러스 감염 진단 플랫폼 적용 37

나. 개발된 helicase 활성 분석법을 통한 FDA 승인된 화합물 라이브러리 스크리닝 39

다. 개발된 RNA dependent RNA polymerase 활성 분석법을 통한 FDA 승인된 화합물 라이브러리 스크리닝 41

5. 5차년도 연구내용 43

가. 도출된 신약 후보군들의 세포 독성 테스트 수행 43

나. 바이러스성 helicase 저해제의 세포 수준에서의 바이러스 활생 억제 및 치료 효율 확인 43

다. 바이러스성 RdRp 저해제의 세포 수준에서의 바이러스 활생 억제 및 치료 효율 확인 45

라. 바이러스성 helicase 및 RdRp 저해제의 복합 처리를 통한 치료에서의 상호 증대효과 확인 45

3. 목표 달성도 및 관련 분야 기여도 47

3-1. 목표 47

3-2. 목표 달성여부 47

(1) 연구개발의 최종목표 47

(2) 연차별 연구개발 목표 및 내용 47

(3) 계획대비 달성도(선정 시 제시된 연구목표) 48

(4) 위 연구목표(총연구기간)에서 중요도 순으로 4~5개 목표 추출 및 가중치 부여 51

3-3. 목표 미달성 시 원인(사유) 및 차후대책(후속연구의 필요성 등) 51

4. 연구개발성과의 활용 계획 등 52

붙임. 참고문헌 53

별첨. 주관연구기관의 자체평가 의견서[내용없음] 5

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